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操控大腦活動:光遺傳技術(shù)讓神經(jīng)元控制從科幻到現(xiàn)實(shí)!

來源:上海玉研科學(xué)儀器有限公司      分類: 2024-08-06 18:45:07 205閱讀次數(shù)
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一、經(jīng)典的電影情節(jié):操控大腦!



如果看過電影《超體》的同學(xué),想必一定對這一幕印象深刻——被強(qiáng)迫幫人送貨的年輕女子露西,遭遇了窮兇極惡的黑幫頭目一伙。她被張先生在腹部縫入了神秘藥品,以此將藥品偷偷帶入不同國家。在臺北盤桓期間,露西遭到暴打,以致藥品破裂進(jìn)入血液之中


誰知令人難以置信的事情就此發(fā)生,藥品激發(fā)了露西大腦的潛力,令人腦中約90%的神經(jīng)元相繼蘇醒。伴隨著身體的飛快進(jìn)化,露西掌握了越來越多人們所謂的超能力


關(guān)于各種途徑控制大腦活動的科幻題材已流行數(shù)十年,實(shí)際上,其中藥物、電刺激、磁刺激等途徑在人類臨床上目前已得到了廣泛應(yīng)用


電影《超體》海報(bào)



二、光可以控制大腦嗎?


以往的科幻電影中,關(guān)于人類腦控制主要通過化學(xué)物質(zhì)、意念、電刺激等各種各樣的形式,但在1997年上映的一部電影《黑衣人》中,我們看到一個場面,特工處理完外星人出沒現(xiàn)場之后會掏出一個發(fā)光棒,讓圍觀群眾“往這兒看”, 隨后強(qiáng)光一閃,圍觀者的短時記憶就被抹去,不再記得見過奇怪外星生物的經(jīng)歷。不難看出在二十多年前,人類就進(jìn)行了對光控制大腦的探索和遐想,而這在當(dāng)時只是電影的科幻題材 


那么現(xiàn)在,真的有這樣的技術(shù),能夠用光來控制大腦嗎?當(dāng)然有,那就是通過光遺傳學(xué)方法,雖然沒有電影里“強(qiáng)光一閃”表現(xiàn)得那么簡單,但也能夠?qū)崿F(xiàn)對大腦的控制



電影《黑衣人》海報(bào)



三、光遺傳學(xué)的出現(xiàn)


實(shí)際上,我們的科學(xué)家早從21世紀(jì)初就開始了對光和大腦之間關(guān)系的探究 


2002年,斯隆凱特琳癌癥研究中心的Gero Miesenb?ck教授率先嘗試了這個大膽的想法,他把來自無脊椎動物的感光蛋白表達(dá)在大鼠細(xì)胞上,并在培養(yǎng)皿中看到了神經(jīng)元響應(yīng)光刺激的現(xiàn)象 


2005年,斯坦福大學(xué)Karl Deisseroth實(shí)驗(yàn)室通過在神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)光敏蛋白,響應(yīng)不同波長的光刺激實(shí)現(xiàn)對神經(jīng)功能的調(diào)控,宣布人類正式擁有了精準(zhǔn)操控大腦的工具 


2006 年, Karl Deisseroth首次提出光遺傳學(xué)(Optogenetics),并與26歲的Edward Boyden一起,開創(chuàng)光遺傳學(xué)時代 


Nature Methods雜志評選出2010年度研究方法——光遺傳學(xué)(Optogenetics),并在十周年之際推出了紀(jì)念特刊點(diǎn)評了在過去十年中對生物學(xué)研究影響最深的十大技術(shù),其中就包括光遺傳學(xué)技術(shù)


2015年,Nature Neuroscience雜志為紀(jì)念光遺傳學(xué)十周年特地撰文,直言“光遺傳學(xué)打開了通往夢寐以求實(shí)驗(yàn)的大門”,甚至有科學(xué)家預(yù)言:“光遺傳學(xué)注定會獲得諾貝爾獎”





四、什么是光遺傳學(xué)?


在經(jīng)典的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,控制神經(jīng)細(xì)胞需要一些比較粗暴的手段,如電刺激、損傷腦區(qū)或是化學(xué)物質(zhì)干預(yù)。實(shí)驗(yàn)效果往往不盡人意,而光遺傳方法可通過控制單個神經(jīng)元很好地解決了這個問題


光遺傳學(xué)是遺傳學(xué)(重組DNA技術(shù))與光學(xué)相結(jié)合的一種細(xì)胞生物學(xué)研究技術(shù)方法。通常利用病毒載體或者轉(zhuǎn)基因技術(shù)手段在受體細(xì)胞中表達(dá)光受體(光敏蛋白)離子通道,通過特異波長的光進(jìn)行定向性的激活或抑制細(xì)胞的發(fā)放電活動




實(shí)驗(yàn)流程


Step1 將光敏蛋白基因在目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)表達(dá):將載有光敏蛋白的病毒轉(zhuǎn)染進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞內(nèi),通過啟動子等將光敏蛋白表達(dá)在細(xì)胞膜上


Step2 植入光纖導(dǎo)管或光遺傳電極:向注射病毒的位置植入光纖導(dǎo)管,通過光纖導(dǎo)管輸入特定波長的光刺激,以啟動或抑制光敏蛋白


Step3 采集光刺激的生理效應(yīng):光刺激之后的細(xì)胞、組織或生物體會出現(xiàn)相應(yīng)的生理上或行為上的變化,通過腦電肌電采集、腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)檢測或行為視頻采集可將光遺傳引起不同維度的改變記錄下來


在早期的光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)中,通常是對動物的大片腦區(qū)施加光刺激,這種情況下的光刺激遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出了實(shí)驗(yàn)所需要的強(qiáng)度。隨著光遺傳學(xué)工具的改進(jìn)和對實(shí)驗(yàn)對象腦區(qū)更精確位置的定位,通過光纖更為精準(zhǔn)地進(jìn)行光刺激正成為光遺傳技術(shù)的關(guān)鍵



這只被植入了光纖導(dǎo)管的小鼠登上了無數(shù)的頂級期刊



五、美國Pinnacle光遺傳系統(tǒng)



需要注意的是,光遺傳系統(tǒng)只是一個研究工具,是一個用光控制腦神經(jīng)活動的“開關(guān)”,其本身并不具備檢測功能


科學(xué)家們在進(jìn)行動物腦研究時,為了檢測光刺激的效應(yīng),往往需要搭配腦電肌電采集、腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)檢測、行為視頻錄制等模塊進(jìn)行多維度分析




美國Pinnacle光遺傳學(xué)系統(tǒng)則在光遺傳刺激模塊基礎(chǔ)上,將專業(yè)的腦電肌電采集、神經(jīng)遞質(zhì)檢測和行為視頻采集等模塊集成為高度兼容的一站式系統(tǒng)。可支持研究者從植入光纖探針、實(shí)行特定波長的光刺激到采集刺激前后動物生理學(xué)、行為學(xué)變化的全部實(shí)驗(yàn)過程




市面上同類設(shè)備功能單一,而美國Pinnacle光遺傳學(xué)系統(tǒng)因其高拓展性的特點(diǎn)可進(jìn)行不同檢測


(圖1)行為視頻采集+神經(jīng)遞質(zhì)檢測+腦電肌電采集+光刺激系統(tǒng)組成

(圖2)光刺激神經(jīng)元活


系統(tǒng)特點(diǎn)


1.可自由搭配腦電肌電信號采集、神經(jīng)遞質(zhì)檢測、行為視頻采集系統(tǒng)使用,配置靈活性高

2.光刺激采用電轉(zhuǎn)換器驅(qū)動光纖探針,無需額外配置光轉(zhuǎn)換器

3.多種波長的LED探針可選,若需更換不同波長光刺激,只需更換探針即可,應(yīng)用廣泛,使用成本低

4.時間控制精度高,可達(dá)毫秒或亞毫秒級別

5.光刺激空間的特異性和對通道蛋白的特異性強(qiáng)

6.LED光源作用直接,光刺激熱效應(yīng)對動物損傷小



多種波長的LED探針選擇



六、光遺傳研究系統(tǒng)應(yīng)用方案


光遺傳系統(tǒng)搭配腦電肌電采集系統(tǒng)


Pinnacle光纖探針的套管和預(yù)制頭帽通過牙科水泥固定在動物頭骨上,同時通過在腦內(nèi)光刺激對應(yīng)的位置或皮層植入腦電電極來采集動物的腦電信號


系統(tǒng)可測量光刺激前、中、后的神經(jīng)元放電活動,精準(zhǔn)記錄光刺激對神經(jīng)元產(chǎn)生的激活或抑制作用



光遺傳系統(tǒng)搭配生物傳感器


光遺傳學(xué)搭配生物傳感器,在給予光刺激的同時檢測腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)的濃度變化,可以更好地研究腦區(qū)神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)功能和行為的關(guān)系。下圖顯示了光遺傳學(xué)技術(shù)與腦電采集系統(tǒng)、生物傳感器相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)結(jié)果



在表達(dá)視紫紅質(zhì)-2的轉(zhuǎn)基因小鼠腦區(qū)通過手術(shù)植入兩通道皮層腦電圖記錄電極(EEG1、EEG2),在右側(cè)海馬區(qū)植入LED光線探針和深層電極,并在右側(cè)額葉皮層植入谷氨酸生物傳感器


手術(shù)后一周用藍(lán)色(445nm)的給與光刺激20秒。在刺激中和刺激后三通道的電極均記錄到明顯的癲癇發(fā)作活動,這便是通過光遺傳方法激活了相應(yīng)的神經(jīng)元通過生物傳感器亞秒級檢測右側(cè)額葉皮層的谷氨酸釋放情況,實(shí)時亞秒級數(shù)據(jù)變化可與光遺傳刺激精確計(jì)時完美同步,數(shù)據(jù)顯示谷氨酸的濃度變化與癲癇發(fā)作緊密相關(guān),在癲癇發(fā)作事件結(jié)束后谷氨酸濃度急劇下降


光遺傳搭配FSCV系統(tǒng)


Pinnacle的光遺傳/快速掃描循環(huán)伏安法(FSCV)集成系統(tǒng)為大小鼠光遺傳結(jié)合FSCV神經(jīng)遞質(zhì)檢測實(shí)驗(yàn)提供了一個簡單有效的解決方案


研究人員可以將光遺傳學(xué)與電化學(xué)記錄無縫集成,可檢測動物腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)釋放,為光遺傳實(shí)驗(yàn)光刺激前后神經(jīng)遞質(zhì)的電化學(xué)檢測提供了有力的工具


圖:分別對空白對照小鼠和東莨菪堿治療小鼠進(jìn)行光遺傳刺激實(shí)驗(yàn),分別記錄NB光刺激前、刺激中和刺激后兩組小鼠腦內(nèi)腺苷濃度變化曲線圖



七、更多應(yīng)用案例


案例一


將編碼視紫紅質(zhì)通道蛋白-2的病毒注射到大鼠上丘深層和中間層,并在同一部位植入頭戴式LED光纖探針,使用毛果蕓香堿誘導(dǎo)Sprague-Dawley大鼠癲癇持續(xù)發(fā)作,并維持到自發(fā)性發(fā)作,然后用5Hz或100Hz的光刺激該腦區(qū),并監(jiān)測大鼠癲癇發(fā)作次數(shù)、發(fā)作持續(xù)時間和癲癇發(fā)作行為



圖A:*處為光纖探針和套管的植入位置;

圖B:箭頭表示mCherry陽性(表達(dá)chr2)神經(jīng)元細(xì)胞;

圖C:腦圖譜冠狀面上丘深層和中間層

——Safwan K. Hyder, et al., Optogenetic activation of the superior colliculus attenuates spontaneous seizures in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy


案例二



在表達(dá)視紫紅質(zhì)通道蛋白-2的轉(zhuǎn)基因小鼠的海馬體中植入套管和深度電極以及兩個皮層電極。在前額葉皮層放置了第二根套管用于記錄谷氨酸變化。手術(shù)后一周,將藍(lán)色(445nm)LED光纖探針插入引導(dǎo)套管中。在20 Hz和10%的占空比下進(jìn)行>100mW/mm2的刺激,為了激發(fā)癲癇活動,每只動物刺激10或20秒,每天6次(3小時內(nèi)每30分鐘一次),持續(xù)2-7天,觀察光遺傳刺激誘發(fā)癲癇發(fā)作的腦電信號及腦內(nèi)谷氨酸濃度的變化


——Erik Naylor, et al., Integration of Optogenetic Stimulation with Neuronal and Neurotransmitter Recordings - Kindling Using Optogenetics






部分用戶名單

Partial user list





部分發(fā)表文獻(xiàn)

Partially published literature


[1].Liu, Q., et al., A clock-dependent brake for rhythmic arousal in the dorsomedial hypothalamus. Nature communications, 2023. 14(1): p. 6381


[2].Hyder, S.K., A. Ghosh and P.A. Forcelli, Optogenetic activation of the superior colliculus attenuates spontaneous seizures in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy. Epilepsia, 2023. 64(2): p. 524-535


[3].Campos-Rodriguez, C., D. Palmer and P.A. Forcelli, Optogenetic stimulation of the superior colliculus suppresses genetic absence seizures. Brain, 2023. 146(10): p. 4320-4335


[4].Huffman, D., et al., A real‐time sleep scoring framework for closed‐loop sleep manipulation in mice. Journal of Sleep Research, 2021. 30(4): p. e13262


[5].Gao, C., et al., Two genetically, anatomically and functionally distinct cell types segregate across anteroposterior axis of paraventricular thalamus. Nature neuroscience, 2020. 23(2): p. 217-228


[6].Jiang-Xie, L., et al., A common neuroendocrine substrate for diverse general anesthetics and sleep. Neuron, 2019. 102(5): p. 1053-1065. e4


[7].Pedersen, N.P., et al., Supramammillary glutamate neurons are a key node of the arousal system. Nature communications, 2017. 8(1): p. 1405


[8].Zant, J.C., et al., Cholinergic neurons in the basal forebrain promote wakefulness by actions on neighboring non-cholinergic neurons: an opto-dialysis study. Journal of Neuroscience, 2016. 36(6): p. 2057-2067


[9].Soper, C., et al., Optogenetic activation of superior colliculus neurons suppresses seizures originating in diverse brain networks. Neurobiology of disease, 2016. 87: p. 102-115 


[10].Ito, H., et al., Analysis of sleep disorders under pain using an optogenetic tool: possible involvement of the activation of dorsal raphe nucleus-serotonergic neurons. Molecular brain, 2013. 6: p. 1-10.




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