單細胞分選器分選要考慮的問題
單細胞分選器分選要考慮的問題。眾所周知傳統的生物學分析方法常見的研究對象就屬群體細胞了,可這么一來使得細胞之間的生物學差異可能會相互掩蓋,生物信息容易消失在大背景中。由于基因隨機表達的細胞異質性,很難解釋細胞和細胞之間的在轉錄和翻譯水平的差異 ,所以在單細胞層面研究基因組學、表觀基因組學和轉錄組學就顯得尤為重要了。
單細胞分選器以單細胞測序應用為例,想在單個細胞水平上進行測序,首先就需要將它們從群體細胞中分離出來,那么單細胞的精 準分離則是后續完成準確測序的前提, 就提到幾種單細胞分選方法。
利用流式細胞分選技術進行的單細胞分選,具有精度高、通量大、分選參數多,成本相對低等優點。
但要通過流式分選出足夠多的符合要求的單細胞進行下游實驗并沒有那么容易。下面三方面是必須要考慮的問題:
1、活性
細胞活性狀態對后續實驗而言非常重要,就拿轉錄組分析為例,無論是RNA-Seq還是高通量表達譜芯片技術,都需要高質量的RNA樣本,細胞活性不好或死細胞會直接導致RNA降解,實驗無法繼續。
2、精度
流式分選是精密度超高的儀器,稍稍不同的參數(激光、液流等)的設置都會直接造成結果偏差;另外既然是想研究單細胞,那么就得確保分選得到的確為單個細胞,否則同樣沒有意義。
3、效率
自動化替代人工無疑是提高效率、節省成本的有力舉措;當你需要分選超低含量的細胞時,務必是個長時間工程,鞘液用光時,其更換繁瑣度、耗時、連續性等都是需要考慮的。
如此看來,單細胞分選確實不容易。 幸好,科技的進步, 使得單細胞分選,如同玩電腦一般簡單。利用空氣激發和溫控系統,實現了高活性分選。
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