ELISA實驗原理：ELISA的原理、類型及操作步驟

　　ELISA的原理

　　ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應的結果，使測定方法達到很高的敏感度。

　　ELISA方法類型和操作步驟

　　elisa可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標記的抗原或抗體，③酶作用的底物。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。

　　(一)雙抗體夾心法

　　雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。

　　(2)加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。

　　(3)加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

　　(4)加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

　　根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。

　　(二)雙位點一步法

　　在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。

　　在一步法測定中，應注意鉤狀效應(hookeffect)，類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低于實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。

　　(三)間接法測抗體

　　間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：

　　(1)將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。

　　(2)加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質由于不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。

　　(3)加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接dibiao記上酶。洗滌后，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。

　　(4)加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。

　　本法只要更換不同的固相抗原，可以用一種酶標抗抗體檢測各種與抗原相應的抗體。

　　(四)競爭法

　　競爭法可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：

　　(1)將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。

　　(2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫后，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。

　　(3)加底物顯色：參考管中由于結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。

　　(五)捕獲法測IgM抗體

　　血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗本多用捕獲法，先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。操作步驟如下：

　　(1)將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。

　　(2)加入稀釋的血清標本：保溫反應后血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。

　　(3)加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。

　　(4)加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。

　　(5)加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。

　　(六)應用親和素和生物素的ELISA

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　　實驗室組織類樣品在進行研磨前處理時，往往要將樣品分成少量多批次，這樣可以盡可能地滿足實驗檢測要求，提高實驗效率。為達到這樣的效果，我們需要用到多樣品組織研磨機。

　　多樣品組織研磨機是高通量組織研磨儀搭配研磨適配器組成的，原本搭載的兩個球磨罐，替換成了可裝載多個離心管的研磨適配器，以實現少量多批次研磨的目標。

　　多樣品組織研磨機操作步驟：

　　1、將簡單處理的組織樣品和適量研磨球放入離心管中，然后將裝好樣品的離心管放入研磨適配器中。

　　2、如果樣品需要低溫研磨，可先將裝有樣品的適配器放入液氮罐中冷凍降溫，幾分鐘后取出。

　　3、將冷凍后的研磨適配器放在夾具中間，調整位置后利用自動中心定位的緊固裝置和安全鎖緊裝置進行固定。

　　4、蓋上設備倉蓋，通過液晶觸摸屏設置振動頻率、振動時間。

　　5、啟動設備，開始對樣品進行破碎研磨，可從觀察窗觀察研磨平臺運行情況。

　　6、等待研磨完成，打開倉蓋，取出樣品，關閉設備。

　　多樣品組織研磨機工作原理：

　　多樣品組織研磨機本質上是二維振動球磨機，其工作區域有兩個搖臂，運行時會做高頻次的“∞”形橫向水平擺動，高速運動的搖臂會帶動研磨罐及罐內研磨球，賦予其動能，研磨球對樣品進行撞擊、擠壓和摩擦，實現樣品的精細研磨。

　　相比于常規型號的設備，多樣品組織研磨機用研磨適配器替換了研磨罐，從而可以裝填更多樣品。研磨適配器是類似于離心管架的容器，內部可以放置多個離心管，離心管內部可以放置樣品及研磨球。設備運行時，離心管內的研磨球對樣品進行撞擊、摩擦和擠壓，完成樣品的精細研磨。

　　以上就是對多樣品組織研磨機的工作原理和操作使用步驟的介紹，多樣品組織研磨機對于動物、植物組織樣品研磨、生物細胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的處理效果，應用領域涵蓋農業、食品、生物、環境等多個行業。

　　實驗室組織類樣品在進行研磨前處理時，往往要將樣品分成少量多批次，這樣可以盡可能地滿足實驗檢測要求，提高實驗效率。為達到這樣的效果，我們需要用到組織研磨機。

　　組織研磨機是高通量組織研磨儀搭配研磨適配器組成的，原本搭載的兩個球磨罐，替換成了可裝載多個離心管的研磨適配器，以實現少量多批次研磨的目標。下面上海凈信就來詳細介紹下組織研磨機的工作原理及操作使用步驟。

　　組織研磨機工作原理

　　組織研磨機本質上是二維振動球磨機，其工作區域有兩個搖臂，運行時會做高頻次的“∞”形橫向水平擺動，高速運動的搖臂會帶動研磨罐及罐內研磨球，賦予其動能，研磨球對樣品進行撞擊、擠壓和摩擦，實現樣品的精細研磨。

　　相比于常規型號的設備，組織研磨機用研磨適配器替換了研磨罐，從而可以裝填更多樣品。研磨適配器是類似于離心管架的容器，內部可以放置多個離心管，離心管內部可以放置樣品及研磨球。設備運行時，離心管內的研磨球對樣品進行撞擊、摩擦和擠壓，完成樣品的精細研磨。

　　組織研磨機操作使用步驟

　　1、將簡單處理的組織樣品和適量研磨球放入離心管中，然后將裝好樣品的離心管放入研磨適配器中。

　　2、如果樣品需要低溫研磨，可先將裝有樣品的適配器放入液氮罐中冷凍降溫，幾分鐘后取出。

　　3、將冷凍后的研磨適配器放在夾具中間，調整位置后利用自動中心定位的緊固裝置和安全鎖緊裝置進行固定。

　　4、蓋上設備倉蓋，通過液晶觸摸屏設置振動頻率、振動時間。

　　5、啟動設備，開始對樣品進行破碎研磨，可從觀察窗觀察研磨平臺運行情況。

　　6、等待研磨完成，打開倉蓋，取出樣品，關閉設備。

　　組織研磨機實驗效果案例：

　　組織研磨對肺組織研磨效果圖

　　組織研磨對柑橘研磨效果圖

　　組織研磨對PCT材料研磨效果圖

　　組織研磨對多孔材料研磨效果圖

　　組織研磨對水凝膠研磨效果圖

　　組織研磨對老鼠肝組織研磨效果圖

　　以上就是對組織研磨機的工作原理和操作使用步驟的介紹，多樣品組織研磨機對于動物、植物組織樣品研磨、生物細胞破壁、DNA/RNA提取都有良好的處理效果，應用領域涵蓋農業、食品、生物、環境等多個行業。

紫外老化試驗箱是一種用于模擬自然環境中的紫外線、濕度和溫度對材料老化影響的設備。它被廣泛用于研究材料的耐久性、性能和可靠性，是產品質量控制和研發過程中不可或缺的實驗設備。

紫外老化試驗箱通常由箱體、紫外燈、控溫系統、濕度控制系統和樣品旋轉系統等組成。箱體用于容納樣品，紫外燈用于模擬太陽光中的紫外線，控溫系統用于控制試驗溫度，濕度控制系統用于控制試驗濕度，樣品旋轉系統用于使樣品均勻受到紫外線的照射。

操作紫外老化試驗箱的步驟如下：

1. 準備樣品：將需要測試的材料制作成標準樣件，并清洗干凈。

2. 設置試驗參數：根據測試需求，設置試驗溫度、試驗濕度和紫外燈的照射時間等參數。

3. 將樣品放入試驗箱：將準備好的樣品放入試驗箱中，確保樣品均勻受到紫外線的照射。

4. 開啟試驗箱：開啟試驗箱的電源，啟動試驗。

5. 定期觀察樣品的的變化：在試驗過程中，需要定期觀察樣品的顏色變化、性能變化等，記錄實驗數據。

6. 結束試驗：達到設定的試驗時間后，關閉試驗箱的電源，結束試驗。

使用紫外老化試驗箱時需要注意以下事項：

1. 注意安全：試驗過程中，需要避免手伸入試驗箱中，以防燙傷或者紫外線過度照射傷害皮膚。

2. 保養設備：定期清洗試驗箱內部，更換濾網，保持設備的良好運行狀態。

3. 正確使用設備：根據設備操作手冊進行操作，避免誤操作導致設備損壞或者樣品測試結果不準確。

在使用紫外老化試驗箱的過程中，可能會遇到一些問題，例如紫外燈不亮、控溫系統失靈等。對于這些問題，可以參考設備操作手冊或者聯系設備生產商進行解決。

紫外老化試驗箱具有模擬自然環境老化的作用，可以有效地檢測材料的耐久性、性能和可靠性。但是，由于設備的價格較高，維護成本也較高，因此需要在購買和維護設備時進行綜合考慮。

總之，紫外老化試驗箱是一種重要的材料老化測試設備，可以有效地幫助研究人員了解材料的性能和可靠性。在使用設備時，需要注意安全和設備的保養，同時正確使用設備，避免誤操作對設備造成損壞或者影響測試結果的準確性。