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- 生物技術(shù)在環(huán)境中的應(yīng)用?
- 《分析化學(xué)在生物技術(shù)中的應(yīng)用》
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- 環(huán)境生物技術(shù)的環(huán)境保護(hù)
- 從免疫學(xué)和分子生物學(xué)討論現(xiàn)代生物技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用
- 從免疫學(xué)和分子生物學(xué)討論現(xiàn)代生物技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用,2000字左右... 從免疫學(xué)和分子生物學(xué)討論現(xiàn)代生物技術(shù)在食品檢測(cè)中的應(yīng)用,2000字左右 展開
- 各種物料在離心噴霧干燥機(jī)中的溫度環(huán)境應(yīng)用
離心噴霧干燥機(jī)采用高速離心運(yùn)動(dòng)的盤式霧化,將物料霧化成霧狀液滴,與經(jīng)過(guò)特殊分布進(jìn)入塔體的熱空氣在相配合的運(yùn)動(dòng)軌跡中同時(shí)進(jìn)行熱交換,在極短時(shí)間內(nèi)蒸發(fā)掉水份,形成均勻有粉狀干成品。離心噴霧干燥機(jī)廣泛用于化工、食品、醫(yī)藥、石化、輕工、農(nóng)藥等行業(yè)的干燥作用。
離心噴霧干燥機(jī)干燥速度快,料液經(jīng)霧化后表面積大大增加,在熱風(fēng)氣流中,瞬間就可蒸發(fā)95%—98%的水份,完成干燥時(shí)間僅需數(shù)秒,特別適用于熱敏性物料的干燥。產(chǎn)品具有良好的均勻度、流動(dòng)性和溶解性,產(chǎn)品純度高,質(zhì)量好。生產(chǎn)過(guò)程簡(jiǎn)化,操作控制方便。對(duì)于含濕量40-60%(特殊物料可達(dá)90%)的液體能一次干燥成粉粒產(chǎn)品,干燥后不需粉碎和篩選,減少生產(chǎn)工序,提高產(chǎn)品純度。對(duì)產(chǎn)品粒徑,松密度,水份,在一定范圍內(nèi)可通過(guò)改變操作條件進(jìn)行調(diào)整,控制和管理都很方便。
噴霧干燥過(guò)程完全依賴于組合物的產(chǎn)品。有些是非常容易和其他非常難以干燥。
排出的空氣的總水分含量是*重要的參數(shù)之一。這取決于組合物的產(chǎn)品,例如在排出空氣中的總水分含量高,可干燥的產(chǎn)品具有高的蛋白質(zhì)含量,而高碳水化合物含量要求低的水分含量,以避免粘在腔室,管道和旋風(fēng)粉末。
這也是為什么在周圍空氣中的總水分含量是一個(gè)重要的參數(shù),知道前工廠的設(shè)計(jì),作為減少,如果周圍環(huán)境的總水分高“干燥電位”。
知道的另一個(gè)重要參數(shù)是在濃縮物中的*大固體含量。這是粘度驅(qū)動(dòng)的,因此也取決于該組合物的產(chǎn)品。作為一個(gè)經(jīng)驗(yàn)法則適用以下情況:
脂肪含量高:允許更高固形物含量。需要較低的干燥溫度,以避免粘(即在排出的廢氣中的總水分含量低)。
蛋白質(zhì)含量高:要求較低的固體含量,由于粘度(水解蛋白除外)。允許較高的干燥溫度不沾(即總水分含量高的廢氣)。的蛋白質(zhì)含量較高,更難以成為附聚過(guò)程。
碳水化合物含量高:允許更高的固體含量(除淀粉,由于其高粘度)的濃縮物。允許較高的噴霧干燥溫度不沾,如果碳水化合物的高分子量型(例如,麥芽糖糊精和淀粉),這會(huì)導(dǎo)致在玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的增加。腔室排出的空氣中的水分含量可以更高的干燥粉末時(shí),具有較高的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,從而在更經(jīng)濟(jì)的干燥。
如果碳水化合物是低分子量型(如:糖,乳糖和葡萄糖漿),它會(huì)導(dǎo)致在玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,它要求較低的噴霧干燥溫度,以避免粘(即在較低的總水分含量減少排出的空氣)。
- MBP標(biāo)簽:深度解析其蛋白大小、序列及其在生物技術(shù)中的應(yīng)用
MBP(麥芽糖結(jié)合蛋白)標(biāo)簽蛋白大小為40kDa,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過(guò)量表達(dá)的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBP標(biāo)簽可通過(guò)免疫分析很方便地檢測(cè)。有必要用位點(diǎn)專一的蛋白酶切割標(biāo)簽。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá),MBP可以融合在蛋白的N端或C端。
MBP標(biāo)簽序列:396 AA
純化:融合蛋白可通過(guò)交聯(lián)淀粉親和層析一步純化。結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫。結(jié)合親和力在微摩爾范圍。一些融合蛋白在0.2% Triton X-100或0.25% Tween 20存在下不能有效結(jié)合,而其他融合蛋白則不受影響。緩沖條件為pH7.0到8.5,鹽濃度可高達(dá)1M,但不能使用變性劑。如果要去除MBP融合部分,可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。
mbp標(biāo)簽優(yōu)缺點(diǎn):
簡(jiǎn)單親和純化即可實(shí)現(xiàn);
增加蛋白表達(dá)量和蛋白穩(wěn)定性;
促進(jìn)蛋白的可溶性和正確折疊;
標(biāo)簽較大,對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)/功能會(huì)有一定影響。
常見(jiàn)的蛋白標(biāo)簽:
常見(jiàn)的融合標(biāo)簽包括谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶 (GST)、麥芽糖結(jié)合蛋白(MBP)、幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白(CBD)、硫氧還蛋白(Trx)、鏈霉親和素、多聚組氨酸(Poly-His)、小分子泛素樣修飾蛋白(SUMO)和血凝素標(biāo)簽(HA)。
GST:
GST(谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶) 標(biāo)簽蛋白本身是一個(gè)在解-毒過(guò)程中起到重要作用的轉(zhuǎn)移酶,它的天然大小為26KD。將它應(yīng)用在原核表達(dá)的原因大致有兩個(gè),一個(gè)是因?yàn)樗且粋€(gè)高度可溶的蛋白,希望可以利用它增加外源蛋白的可溶性;另一個(gè)是它可以在大腸桿菌中大量表達(dá),起到提高表達(dá)量的作用。GST融合表達(dá)系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于各種融合蛋白的表達(dá),可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細(xì)胞中表達(dá)。結(jié)合的融合蛋白在非變性條件下用10mM 還原型谷胱甘肽洗脫。在大多數(shù)情況下,融合蛋白在水溶液中是可溶的,并形成二體。GST標(biāo)簽可用酶學(xué)分析或免疫分析很方便的檢測(cè)。標(biāo)簽有助于保護(hù)重組蛋白免受胞外蛋白酶的降解并提高其穩(wěn)定性。在大多數(shù)情況下GST融合蛋白是完全或部分可溶的。純化:該表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的GST標(biāo)簽蛋白可直接從細(xì)菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathionesepharose)親和樹脂進(jìn)行純化。GST標(biāo)簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫,因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在變性條件下會(huì)失去對(duì)谷胱甘肽樹脂的結(jié)合能力,因此不能在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑如:鹽酸胍或尿素等。如果要去除GST融合部分,可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測(cè):可用GST抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測(cè)。
HA:
HA標(biāo)簽蛋白,標(biāo)簽序列YPYDVPDYA,源于流感病毒的紅細(xì)胞凝集素表面抗原決定簇,9個(gè)氨基酸,對(duì)外源靶蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響小, 容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白融合到N端或者C端。易于用Anti-HA抗體檢測(cè)和ELISA檢測(cè)。用HA peptide可實(shí)現(xiàn)帶HA tag的蛋白洗脫,0.15M Arginine-HCl緩沖液, pH3.0可實(shí)現(xiàn)蛋白純化beads 的重生。
……
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