冠狀病毒和新冠狀病毒肺炎COVID-19

圖 1

2019-nCoV 病毒顆粒渲染圖

冠狀病毒是屬于冠狀病毒科-網巢病毒目的一種包膜型正義RNA病毒，廣泛存在于人類和其他哺乳動物體內。這些病毒是帶有正單鏈RNA基因組和螺旋對稱的核衣殼的包膜病毒。冠狀病毒的基因組大小大約在26到32千堿基之間，是RNA病毒中ZD的一種。

COVID-19 檢測的RT-QPCR 工作流

逆轉錄QPCR(RT-QPCR)結合RT-PCR和QPCR，通常用于檢測呼吸道分泌物中的致病病毒。

臨床呼吸道樣本或其他可接受的樣本，并按以下步驟進行測試。(圖2)

圖 2 

COVID-19的RT-QPCR工作流

PIPETMAX 和 RT-QPCR 的自動化

Gilson PIPETMAX^?全自動液樣平臺消除了液樣轉移的人為錯誤風險。單次液樣操作量程范圍為1μL -1200μL，可以同時運行1至8個通道。可移動式托盤能夠適配96和384孔板。(圖 3) 雙在線移液頭可以隨時自動切換步驟所需的不同量程，在運行中移液頭無需硬件更換。如果選配更多的移動托盤，可以滿足在運行方法的同時進行下一輪配置，節約時間。（圖 4）

圖 3 

PIPETMAX^? 和TRILUTION^?micro軟件

圖 4

PIPETMAX 移動托盤

Pipetmax 的特點

PIPETMAX^? 是一套理想的高通量生物分析自動化液樣處理方案。桌面式的尺寸可以輕松地適配任何實驗室。通過外置式UV/HEPA系統，能夠滿足不同實驗規范的需求。PIPETMAX^?可以提升操作人員的精確度、重現性，以及不同病毒樣品之間的一致性。

?PIPETMAX^? 可以消除用戶間的誤差

?保護操作人員遠離病原體

?采用Gilson PIPETMAN^? 技術，確保JZ度

?DIAMOND 帶濾芯吸嘴(圖 5)可以防止氣溶膠污染

?一套真正意義上適合任意試劑、試劑盒及方法的開放系統

RT-QPCR 工作流

核酸提取

RT-QPCR的實驗擴增結果取決于樣品模板RNA的質量和總量。在進行樣品測試前，應該對RNA提取的回收率和純度進行驗證。 

根據商品化的提取試劑盒制造商的建議方法提取樣品，可以得到高度純化的RNA。

質量控制

由于RT-PCR的敏感性，所有檢測應該采用嚴格的質量控制和質量保證流程。所有移液吸嘴均僅使用帶濾芯型號。（圖5）檢測控制應與所有測試樣品同時進行。

圖5

Gilson 易拉裝吸嘴（帶濾芯）

RT-QPCR實驗

RT-QPCR儀的參數(AB 7500 Fast DX)。

混合總管和孔板配置

TaqPath? 一步法RT-qPCR 混合總管

添加樣品模板

小心地加入5.0 μL 樣品至樣品孔。

添加對照模板

加入5 μL的nCoVPC(CDC 陽性對照) RNA 模板至樣品孔。

數據分析及結果

運行完成后，按照儀器廠家的說明對數據進行保存和分析，并在CDC的指導下對數據進行進一步的分析和解讀。

其他自動化應用

QPCR方法，尤其是使用TaqMan探針或類似的熒光雜交探針方法，被廣泛的應用于各類病原體檢測。（圖6）

圖 6

常規病原體檢測實驗

從發表報道中看，利用磁珠技術對腸道病毒、乙型肝炎、丙型肝炎、Epstein-Barr病毒、皰疹病毒、人乳頭瘤病毒、乙型流感和SARS病毒的核酸檢測方法已經實現自動化。 

總結

Gilson 的不同液樣處理產品，例如 PIPETMAX 自動液樣平臺，可以和COVID-19疾病中RT-QPCR工作流結合，滿足自動化需求。不斷增長的檢測量以及檢測方法對提GX率以降低成本并保證實驗結果有了越來越高的要求，因此分子診斷實驗室也向著自動化、集成式、用戶操作降低的方向不斷發展。 

Gilson 自動化液樣處理產品可應用于樣品處理的各個流程，包括分析前的樣品處理、核酸提取、PCR實驗，具有寬泛的自動化和靈活度，提升了測試效率和標準化。(圖 7)

圖 7

分子診斷和篩選應用中不同級別的自動化方案

*本文中的RT-QPCR流程參考于美國CDC在2020年2月4日發布的指引，由于情況的不斷變化可能與實際環境的操作流程有所不同。本文展示了PIPETMAX可以被用于協助完成RT-QPCR方法。