產品描述

DiI是一種親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結構，進入細胞膜后，DiI在整個細胞膜上擴散，最佳濃度時可以使整個細胞膜染色。DiI在進入細胞膜之前熒光非常弱，當與細胞膜結合后其熒光強度大大增強，DiI被激發后可以發出橙紅色的熒光，具有很高的淬滅常數，中等強度的光量子和很短的激發態壽命?？梢杂脴藴实腡RITC濾光片檢測。

DiI通常不會明顯影響細胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經等細胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑（long-term tracer）。除了最簡單的細胞膜熒光標記外，還可以用于檢測細胞的融合和粘附，檢測發育或移植過程中細胞遷移，通過FRAP（Fluorescence Recovery After Photobleaching）檢測脂在細胞膜上的擴散，檢測細胞毒性和標記脂蛋白等。

產品性質

運輸與保存方法

冰袋（wet ice）運輸。產品4ºC干燥避光保存，有效期一年。

注意事項

1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3）本產品僅作科研用途！

使用方法

1. 染色液制備

（1）配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～2 mM。

【注】：a、未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反復凍融，可穩定保存6個月。

b、發現較難溶解時可以適當加熱，并用超聲處理以促進溶解。

（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。

【注】：工作液最終濃度建議根據不同細胞系和實驗體系來優化。

2. 懸浮細胞染色

（1）加入適當體積的染色工作液重懸細胞，使其密度為1×10⁶/mL。

（2）37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20 min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。

（3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5 min。

（4）傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預熱的生長培養液重懸細胞。

（5）重復（3），（4）步驟兩次以上。

3. 貼壁細胞的染色

（1）將貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上。

（2）從培養基中移走蓋玻片，吸走過量培養液，將蓋玻片放在潮濕的環境中。

（3）在蓋玻片的一角加入100 μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

（4）37 ℃孵育細胞 2～20 min，不同的細胞最佳培養時間不同?？梢?0 min作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。

（5）吸干染料工作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10 min，然后吸干培養基。

4. 顯微鏡檢測

（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。

（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設定：

a) DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

b) DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

c) DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

表1 相關產品性質

HB210505