產(chǎn)品描述

堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)是一類水解酶，其通過水解磷酸單酯的作用將底物分子上的磷酸基團除去掉并生成磷酸根離子和自由的羥基。在堿性條件下以核苷酸、蛋白質(zhì)和生物堿等作為去磷酸化作用的底物。該酶是一組同功酶的統(tǒng)稱，如小牛腸堿性磷酸酶(Calf Intestinal AlkalinePhosphatase, CIAP/CIP)被廣泛用于抗體標(biāo)記并最終用于蛋白和核酸的檢測等，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去單磷酸化)等。

BCIP/NBT是堿性磷酸酶的常用底物，在堿性磷酸酶的作用下BCIP會被水解，水解產(chǎn)物會和NBT發(fā)生反應(yīng)形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan物質(zhì)。

本試劑盒可用于細胞或組織的堿性磷酸酶顯色，包括誘導(dǎo)多功能干細胞iPS的鑒定，也可以用于結(jié)合有堿性磷酸酶的膜的Western顯色檢測等。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法
冰袋運輸。4℃保存，有效期1年，染色液BCIP和染色液NBT需避光保藏。

注意事項

1）本產(chǎn)品僅限科學(xué)研究。

2）BCIP對人體有刺激性，NBT對人體有害，請注意適當(dāng)防護。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

4）本產(chǎn)品僅作科研用途！

染色步驟

1、用合適的洗滌液對于組織切片或細胞樣品或膜在與堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體或探針孵育后，洗滌3-5次，每次3-5 min。對于檢測內(nèi)源性堿性磷酸酶的組織或細胞樣品，在固定后，也用合適的洗滌液洗滌3-5次，每次3-5 min。
2、按照 緩沖液：染色液BCIP：染色液NBT=3 mL: 10 µL:20 µL的比例配制適量體積的AP染色工作液。

3、在最后一次洗滌后去除洗滌液，加入適量AP染色工作液。
4、室溫避光孵育5-30 min或更長時間(最長達24 h)，直至顯色達到預(yù)期深淺效果。
5、去除AP染色工作液，用蒸餾水洗滌1-2次即可終止顯色反應(yīng)。
6、對于組織切片或細胞樣品，在顯色反應(yīng)終止后如有必要可用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色觀察。對于膜樣品，顯色反應(yīng)終止后可至室溫晾干避光保存。