產品描述

Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase是經過配體修飾的熱穩定Taq DNA Polymerase，該配體可以隨溫度變化來調節DNA聚合酶活性。在室溫下酶活性被完全封閉，經95℃加熱后活性才被釋放，這樣可防止在樣品準備及反應升溫階段產生非特異擴增和引物二聚體。Hieff®HotStart Taq DNA Polymerase的激活時間只需要2-3 min，兼容現有的PCR程序。

Hieff® HotStart Taq DNA Polymerase的反應緩沖液中的組分、濃度都經過優化，使得引物與模板結合的嚴謹性提高，從而最大程度的減少非特異擴增和引物二聚體，非常適合低拷貝模板的擴增。PCR產物3’端帶A，可克隆至T載體。

產品組分

產品應用

低拷貝基因擴增、基因型鑒定、菌落PCR

活性定義

用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃ 30 min內，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個活性單位（U）。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，有效期2年。

PCR反應體系（50 μL）

【注】：試劑使用：各組分使用前需充分融化混勻。

a）根據具體的實驗應用，需自備相應的反應Buffer。

b）聚合酶濃度：推薦使用2.5 U/50 μL。可以在1.25-5 U/50 μL之間進行優化。

c）PCR Enhancer使用：推薦僅當擴增片段GC含量>60%且優化條件也無法正常擴增時使用。

d）Mg²⁺終濃度：體系終濃度為2 mM。如有特殊需要，可用25 mM MgCl₂，以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。

e）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：

PCR擴增程序
 

【注】：

1）退火溫度和時間：溫度推薦使用50-60℃。退火溫度過低會導致非特異性擴增。引物設計參考熒光定量引物標準。推薦退火時間設置為30 sec，可以在10-30 sec內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度和時間。
2）延伸溫度和時間：溫度推薦使用72℃。時間推薦使用30 sec/kb。
3）擴增產物：請將PCR擴增產物放置于-20℃保存，防止DNA發生降解。
 

注意事項
 

1）推薦使用本公司PCR Enhancer（貨號：10117ES），以擴增高GC含量的目的基因。

2）推薦使用本公司Hieff Clone®（貨號：10907ES和10908ES），以進行快速TA克隆。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
 

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