Hifair^® V nCov Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit是以RNA為模板進行多重定量PCR反應的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉錄和定量PCR在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。

本試劑盒利用耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase高效合成第一鏈cDNA，并利用UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase進行定量擴增。本試劑盒主要包含優化的MP Buffer，Enzymes Mix等，緩沖液中已含有Mg²⁺和dNTP等，并添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升多重qPCR反應擴增效率的因子，能夠保證引物擴增效率的同時，進行多達四重的反應。

產品組分

【注】a) 2×Hifair^® V MP Buffer為Multiplex One Step RT-qPCR Probe Buffer的簡寫。

b) 不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號10200ES產品。

c) Hifair^® V Enzyme Mix主要包含有耐熱Hifair^® V Reverse Transcriptase、RNase inhibitor和UNICON^® HotStart Taq DNA Polymerase。

適用機型

ABI系列：ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;

Bio-Rad系列：Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Roche系列：Roche Applied Science LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;

其他系列：Stratagene MX3000P, MX3005P, MX4000P;

Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;

Qiagen Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler; Illumina Eco qPCR.

運輸與保存方式

冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。本品避免反復凍融。建議分裝保存。

注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
3. 本產品僅作科研用途！
 

反應體系

【注】：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。

a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.4 μM，也可以根據情況在0.1-1.0 μM間進行調整。

b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據具體情況在50-300 nM間調整。

c) 模板稀釋：qPCR靈敏度極高，建議將模板進行稀釋使用，控制Ct值在20-35之間適宜。

d) 反應體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。

e) 體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。

標準擴增程序
 

【注】                                                                                             

a) 逆轉錄：42℃或者50℃均可，時間10-15 min。

b) 擴增反應：擴增反應溫度根據設計的引物Tm值進行調整。CDC官方推薦的ORF1ab和N引物，退火溫度建議≥60℃。

c) 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據最短時間限制進行設置。
 

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