培養(yǎng)方法

HaCaT 人永生化表皮細(xì)胞

貼壁，上皮細(xì)胞樣

編號(hào)： 352100

培養(yǎng)：37℃，5%CO₂ CM2-1 培養(yǎng)液

產(chǎn)品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶

安全等級(jí)： 一級(jí)，安全柜或超凈臺(tái)操作

收貨須知：收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若 長時(shí)間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮保藏；T25 形式，收貨后先培養(yǎng)瓶原裝置于培養(yǎng)箱靜養(yǎng) 4h，然后再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。復(fù)蘇時(shí)每 管一次用完不得留存，復(fù)蘇后傳一代，即可正常使用。請(qǐng)嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

培養(yǎng)條件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培養(yǎng)液。CM2-1 培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

復(fù)蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個(gè)，含 12mL 上述培養(yǎng)液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復(fù)蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時(shí)針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養(yǎng)箱中，過夜換液，2-4 天長滿。

傳代/凍存：將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在顯微鏡下觀察， 期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，吸除大部分胰酶，留約 0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約 2.5min 取出。

①傳代：用 6mL CM2-1 培養(yǎng)液 終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分 3~6 皿培養(yǎng)；

②凍存：用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為 3 支凍存管， 用程序降溫盒于-80℃凍存。

復(fù)蘇質(zhì)量記錄：根據(jù)復(fù)蘇要求，對(duì)以上細(xì)胞株進(jìn)行復(fù)蘇，記錄結(jié)果如下：

項(xiàng)目	質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)	復(fù)蘇記錄
復(fù)活性	18h 貼壁，90h 長滿 80%	過夜 18h 觀察貼壁，76h 密度達(dá) 80%
細(xì)胞形態(tài)	貼壁，上皮細(xì)胞樣	CM2-1 培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，多角形，緊密排列
附圖
結(jié)論	復(fù)活性好，且細(xì)胞形態(tài)無異常，合格

質(zhì)檢員/日期： 朱玥 2020.09.23 審核員簽字：丁保敏