培養(yǎng)方法

Hacat 人永生化表皮細胞

貼壁，上皮細胞樣

編號： 340423

培養(yǎng)：37℃，5%CO₂ CM1-1 培養(yǎng)液

產(chǎn)品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作 收貨須知：收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在 24 小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若 長時間不使用，應過夜轉(zhuǎn)移至液氮保藏；T25 形式，收貨后先培養(yǎng)瓶原裝置于培養(yǎng)箱靜養(yǎng) 4h，然后再對細胞進行常規(guī)操作。復蘇時每 管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

培養(yǎng)條件：37℃，5%CO₂，CM1-1 培養(yǎng)液。CM1-1 培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM 高糖培養(yǎng)液，含谷氨酰胺，含丙酮酸鈉。

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養(yǎng)液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養(yǎng)箱中，過夜換液，2-4 天長滿。

傳代/凍存：將舊培養(yǎng)液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 6mL（/100mm 皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細胞剛有脫落 時，則吸除大部分胰酶，留約 0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約 5min 取出。

①傳代:用 12mL CM1-1 培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后 可分 3~6 皿培養(yǎng)；

②凍存:用 6mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為 6 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質(zhì)量記錄：根據(jù)復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結(jié)果如下：

項目	質(zhì)量標準	復蘇記錄
復活性	12h 貼壁，70h 長滿 80%	過夜 18h 觀察貼壁，66h 密度達 80%
細胞形態(tài)	貼壁，上皮細胞樣	CM1-1 培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細胞樣，多角形，成塊生長
附圖
結(jié)論	復活性好，且細胞形態(tài)無異常，合格

質(zhì)檢員/日期： 張鑫 2019.8.29 審核員簽字：楊晴