培養(yǎng)方法

CCRF-CEM 人急性淋巴細胞白血病 T 淋巴細胞

懸浮，淋巴母細胞樣

編號： 338490

培養(yǎng)：37℃，5%CO₂ CM2-1 培養(yǎng)液

產(chǎn)品形式： 1mL 凍存管 × 2 支、或 離心管 15mL ；

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作

收貨須知：收貨當天發(fā)現(xiàn)異常，請在 24 小時內(nèi)及時聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若 長時間不使用，應過夜轉(zhuǎn)移至液氮保藏；離心管 15mL，收貨后先離心管原裝置于培養(yǎng)箱靜養(yǎng) 4h，然后再對細胞進行常規(guī)操作。復蘇 時每管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發(fā)服務。

培養(yǎng)條件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培養(yǎng)液。CM2-1 培養(yǎng)液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養(yǎng)液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養(yǎng)箱中，過夜換液，3-5 天長滿。

傳代：將培養(yǎng)好的懸浮細胞輕輕吹打均勻，分配至 3~6 個新鮮培養(yǎng)液皿中，輕輕搖勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

凍存：將懸浮細胞轉(zhuǎn)移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細胞，吹打均勻，分為 3 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質(zhì)量記錄：根據(jù)復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結(jié)果如下：

項目	質(zhì)量標準	復蘇記錄
復活性	72h 長滿 80%	接種量 20%，過夜 18h 后觀察懸浮至 40%，72h 后密度達 80%
細胞形態(tài)	懸浮，淋巴母細胞樣	CM2-1 培養(yǎng)液中，懸浮，淋巴母細胞樣，圓形
附圖
結(jié)論	復活性好，且細胞形態(tài)無異常，合格

質(zhì)檢員/日期： 李璐 2020.03.17                  審核員簽字：蘇丹