培養(yǎng)方法

Jurkat 人急性 T 淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

懸浮，淋巴母細(xì)胞樣

編號(hào)： 338495

培養(yǎng)：37℃，5%CO₂ CM12-1 培養(yǎng)液

產(chǎn)品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 離心管 15mL

安全等級(jí)： 一級(jí)，安全柜或超凈臺(tái)操作

收貨須知：收貨當(dāng)天發(fā)現(xiàn)異常，請(qǐng)?jiān)?24 小時(shí)內(nèi)及時(shí)聯(lián)系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時(shí)置于-80℃冰箱保存，若 長(zhǎng)時(shí)間不使用，應(yīng)過夜轉(zhuǎn)移至液氮保藏；離心管 15mL，收貨后先離心管原裝置于培養(yǎng)箱靜養(yǎng) 4h，然后再對(duì)細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)操作。復(fù)蘇 時(shí)每管一次用完不得留存，復(fù)蘇后傳一代，即可正常使用。請(qǐng)嚴(yán)格按照本說明操作，否則造成細(xì)胞失活等情形，不予提供補(bǔ)發(fā)服務(wù)。

培養(yǎng)條件：37℃，5%CO₂，CM12-1 培養(yǎng)液。CM12-1 培養(yǎng)液：85%RPMI-1640+15%FBS。RPMI-1640：1640 培養(yǎng)液，含谷氨酰胺。

復(fù)蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個(gè)，含 12mL 上述培養(yǎng)液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入安全柜復(fù)蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時(shí)針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養(yǎng)箱中，過夜換液，5-7 天長(zhǎng)滿。

傳代：將培養(yǎng)好的懸浮細(xì)胞輕輕吹打均勻，分配至 3~6 個(gè)新鮮培養(yǎng)液皿中，輕輕搖勻后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

凍存：將懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，(110g，3min)離心，離心完成后用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸細(xì)胞，吹打均勻，分為 3 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復(fù)蘇質(zhì)量記錄：根據(jù)復(fù)蘇要求，對(duì)以上細(xì)胞株進(jìn)行復(fù)蘇，記錄結(jié)果如下：

項(xiàng)目	質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)	復(fù)蘇記錄
復(fù)活性	120h 長(zhǎng)滿 80%	接種量 20%，過夜 18h 后觀察懸浮至 40%，108h 后密度達(dá) 90%
細(xì)胞形態(tài)	懸浮，淋巴母細(xì)胞樣	CM12-1 培養(yǎng)液中，懸浮，淋巴母細(xì)胞樣，多數(shù)抱團(tuán)生長(zhǎng)
附圖
結(jié)論：	復(fù)活性好，且細(xì)胞形態(tài)無異常，合格

質(zhì)檢員/日期： 丁保敏 2020.10.20                  審核員簽字：何立勝