產品描述

根據生物學功能及細胞表面的抗原表達，可以將人外周血淋巴細胞分為三群：T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞。T淋巴細胞的作用主要是參與特異抗原介導的細胞免疫反應，并調節B淋巴細胞分泌免疫球蛋白。T淋巴細胞按其功能又可進一步分為輔助/誘導性T細胞和抑制/細胞毒性T細胞。NK細胞，即自然殺傷細胞，介導對某些腫瘤細胞和病毒感染細胞的細胞毒作用，而不依賴于MHC Ⅰ類和Ⅱ類分子的存在。

人淋巴細胞亞群分析試劑盒是由一系列雙色熒光標記抗體組成的試劑盒，主要用于檢測外周血淋巴細胞各亞群占總淋巴細胞的百分率，即成熟T淋巴細胞（CD3＋）、輔助/誘導性T細胞（Th/i :CD3＋CD4＋）、抑制/細胞毒性T細胞（Ts/c: CD3＋CD8＋）、B淋巴細胞（CD19＋）和NK細胞（CD3－CD16＋和/或CD56＋）；還可以計算出Th/Ts（CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋）細胞的比例。

相對于傳統的分析淋巴細胞亞群的方法，流式細胞術將抗體的特異性和流式細胞儀分析單個細胞的敏感性結合起來，使得這一分析方法更精確、更簡便。

產品組分

運輸和保存方法

運輸方式：冰袋運輸

保存方式：4℃避光保存，嚴禁凍存，避免直接暴露于光線下。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）孵育時間、溫度及離心時間應參考操作說明，否則可能影響實驗結果。

3）服用免疫抑制劑的患者其結果可能會異常。

4）溶血標本不能用本試劑盒檢測。

5）抗體試劑中均含有防腐劑疊氮鈉，是一種有毒物質，操作時避免與皮膚、粘膜接觸。

6）本試劑盒只對人的標本做過檢測，未對其它的物種進行檢測。

7）本產品僅作科研用途！

產品應用

試劑40404-A：MIgG2a-FITC/MIgG1-PE，同型對照；用于設定陰性范圍，消除非特異性熒光的干擾。

試劑40404-B：CD45-FITC/CD14-PE，用于淋巴細胞圈門。CD45-FITC，識別所有白細胞；CD14-PE，識別人單核細胞及少量粒細胞。

試劑40404-C：CD3-FITC/CD19-PE，用于確定T淋巴細胞和B淋巴細胞的百分率。CD3-FITC，識別所有成熟T淋巴細胞；CD19-PE識別所有B淋巴細胞。

試劑40404-D：CD3-FITC/CD4-PE，用于確定輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）占總淋巴細胞的百分率；CD4-PE，識別輔助性T細胞（Th/i）及單核細胞。

試劑40404-E：CD3-FITC/CD8-PE，用于確定抑制性T淋巴細胞（CD3+CD8+）占總淋巴細胞的百分率；CD8-PE，識別抑制性T細胞（Ts/c）及NK細胞。

試劑40404-F：CD3-FITC/CD16-PE/CD56-PE，用于確定T淋巴細胞和NK細胞的百分率；CD16與CD56抗體識別NK細胞。

使用方法

1 標本的采集與制備

EDTA抗凝的靜脈血（至少1 mL），建議標本在采集后6 h內進行染色分析。檢測的外周血白細胞濃度在3.0×10³~10.0×10³個/μL。（若高于10.0×10³個/μL，則需要稀釋血標本；若低于10.0×10³個/μL，則需要增加標本量或分離白細胞）

2 紅細胞裂解液的稀釋

用去離子水稀釋溶液40404-G到1×工作液，紅細胞裂解液的溶血效力受溫度影響，使用前要預先平衡至室溫（20℃~25℃）。

【注】稀釋后避光室溫保存，根據每次所需量進行稀釋。

3 染色及固定細胞

1）每份病人標本用六根12×75 mm流式管，分別標上樣品編號（1、2、3……）和管號（A、B、C、D、E、F）。

2）取20 μL試劑A加入到每份樣品的A管中，取20 μL試劑B加入到每份樣品的B管中，取20 μL試劑C加入到每份樣品的C管中，取20 μL試劑D加入到每份樣品的D管中，取20 μL試劑E加入到每份樣品的E管中，取20 μL試劑F加入到每份樣品的F管中。

3）向每份標本的試管中加入100 μL抗凝全血，充分混勻，室溫（20℃~25℃）避光反應20~30 min。

4）每管加入2 mL（1×）紅細胞裂解液（20℃~25℃），充分混勻，室溫避光反應10~12 min，至液體透明。

5）1000 rpm離心5 min，棄上清。

6）加入2 mL PBS洗滌，1000 rpm離心5 min，棄上清。

7）加入0.5 mL 2%甲醛溶液固定細胞，混勻，24 h內上流式細胞儀分析。

【注】若細胞染色后立即上流式細胞儀分析，則不需要用甲醛固定，用0.5 mL PBS洗滌重懸細胞即可上機分析。

4 流式檢測

用流式細胞儀檢測，激發波長Ex=488 nm；發射波長Em=578 nm，PE的橙紅色熒光建議使用FL2通道檢測；FITC最大激發波長為Ex=488 nm，最大發射波長Em=525 nm，FITC的綠色熒光在FL1通道檢測。使用試劑40404-A作為陰性對照，試劑40404-B用于淋巴細胞圈門。