講個笑話：某分子生物學PhD去購物，總價 94，他又買了兩塊錢的東西，心想終于湊了個整數

哈哈哈哈哈老PCR人一秒get！

1980 年代，Kary Mullis Z先提出了 PCR 技術，時光荏苒，如今，PCR 已成為生命科學實驗中應用Z為廣泛的技術之一。

無論是日常中進行突變檢測的科研應用，還是諸如新冠病毒檢測的醫學應用，都離不開 PCR 實驗熟悉的身影。

由于 PCR 實驗應用實在太過于普遍和廣泛，以至于實驗室的許多小伙伴反而會忽視其中的各種細節。

但往往，細節決定成敗，對于 PCR 實驗來說，也是如此。

小 E 嘔心瀝血，總結了以下幾個細節，掌握它，輕松提升 PCR 實驗產量！

細節一：核酸濃度

眾所周知，在 PCR 實驗中，核酸濃度對實驗結果有著重大的影響。而對于核酸濃度，我們可以使用分光光度計來測得。

大家應該都能夠理解「過低濃度會造成 PCR 反應失敗」，但你知道嗎？其實「過高濃度也會導致 PCR 實驗失敗」，原因在于：

過高濃度的核酸會結合掉過多的鎂離子（Mg²⁺），從而造成酶反應活性下降，而且過高的核酸濃度也意味著純化過程中可能會帶來更多酶反應抑制劑，這些狀況都會導致 PCR 反應結果不理想。

小 E 溫馨提醒：在進行 PCR 反應前，請務必使用分光光度計先來測定下模板的濃度哦～

細節二：PCR 體系配制過程

除了實驗中的核酸濃度，PCR 體系的配制過程是否統一也會對 PCR 實驗結果造成重大影響。

當我們進行大量樣品擴增時，請盡量采用較大（足夠容下所有 mastermix）的容器來進行配制，并在配制完成后進行 mastermix 的分裝，這是因為：如果我們使用多個容器去配制同一種 mastermix，那么不同容器中的 PCR 反應體系濃度會由于移液誤差而不一致，這將會在很大程度上降低我們實驗的重復性。

除此之外，在我們將配制好的 PCR 反應液分配到 PCR 管或者 PCR 板的過程中，移液誤差也是不容忽視的。

小 E 溫馨提醒：為了達到Z 好的分液效果，強烈建議大家使用分液器來進行這項操作。

分液器的優點不言而喻，不僅移液的重復性更高，而且具備一次分配多達 100 份液體的能力，能夠有效幫助我們大幅度提升工作效率。

細節三：鎂離子濃度

在 PCR 實驗過程中，除了上述兩個細節之外，還有一個細節非常容易被忽略，那就是鎂離子濃度對 PCR 反應的影響。

鎂離子在反應中與核酸骨架相互作用，并且能夠影響聚合酶的活性。一般來說鎂離子強度在 0.5-5mM 之間, 濃度過低會導致 PCR 產量過低甚至無法擴增，而濃度過高又會造成 PCR 反應特異性降低，擴增出我們不需要的非特異性條帶。

小 E 溫馨提醒：雖然目前一般市售試劑盒中都含有鎂離子成分，但是當我們做擴增不順利的時候，也可以酌情考慮是否是因為鎂離子濃度不合適導致的。

細節四：變性溫度

如果你是 PCR 技術達人，一定了解 Eppendorf 發明的 PCR 梯度技術的重要性，也一定知道在退火步驟中需要進行溫度梯度的優化。小 E 要講到的第四個細節，便和梯度技術息息相關，其實，需要優化的不僅是退火溫度，還有變性溫度。

變性溫度的長短對 PCR 整個過程中的酶活性有著一定的影響，通過優化變性溫度，我們可以近一步提升 PCR 反應的產量。

小 E 溫馨提醒：傳統的 PCR 儀，如果同時優化變性和退火溫度，操作便會過于繁瑣，而這也在客觀上造成了，許多人往往只優化退火這一步而忽視了同樣重要的變性溫度。

由 Eppendorf 推出的 2D 梯度功能，歷史性的改變了這一尷尬局面，能夠同時優化變性和退火溫度，操作更簡便，提升 PCR 反應產量，更易如反掌！

如果你對以上的 PCR 知識都了如指掌，如數家珍，并且對自己的 PCR 知識儲備量足夠自信，那么，就來參加我們的 PCR 知識大挑戰吧，不僅能“一戰成名”，更有好禮相送！

開始答題

1. PCR 技術是由誰在 1980 年代發明的？（單選）

A. James Watson

B. Kary Mullis

C. Albert Einstein

D. Issac Newton

2. 理論上說 PCR 反應每經過一個循環會增加多少目標 DNA 序列？（單選）

A. 1 倍

B. 3 倍

C. 5 倍

D. 是一個隨機數

3. 早期的 PCR 加熱采用的是何種方式？（單選）

A. 水浴

B. 電磁爐

C. 半導體片

D. 加熱絲

4. 以下哪些是 Eppendorf 發明的 PCR 相關技術？（多選）

A. 半導體溫控技術

B. 梯度技術

C. steadyslop 技術

D. 2D 梯度技術

5. 以下哪些場景會應用到定性 PCR？（多選）

A. 疾病檢測

B. 轉基因研究

C. 親子鑒定

D. 作物育種

6. 定性 PCR 儀在二代測序流程中用于？（多選）

A. 溫控孵育

B. 低溫保存樣品

C. 核酸擴增

D. 樣品濃度分析

活動規則：

即日起，按照出題順序在評論區回復你的答案。

▲ Z先全部答對的第 1-5 人將獲得 Eppendorf 定制版情懷游戲機充電寶

▲ 全部答對的第 6-15 人將獲得 Eppendorf 定制版藍牙鼠標

▲ 全部答對的第 16-30 人將獲得 Eppendorf 定制版移液器筆

*以上排名以后臺留言時間為準

小 E 將在收集到 30 份滿分答卷后公開留言

PS：如果你對以上問題并不是太了解，不知道正確答案，小 E 還有錦囊妙計相送，快到寶藏視頻里尋找答案吧！

期待大家的參與喲～