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DNA怎么提???

54zangyang009 2011-11-07 01:59:40 415  瀏覽
  • 方法

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全部評論(3條)

  • 社會你陽哥y 2011-11-08 00:00:00
    百度一下DNA的粗提取與鑒定,有很多參考的,不能復制,對不住了。

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  • 月亮不亮8 2012-06-04 00:00:00
    樣品收集:從培養的LB培養基中吸取1.5ml 細菌培養液,并放到離心機中5000轉離心10分鐘,棄上清;與沉淀物種加入200ul的無菌去離子水,混勻,懸浮沉淀;懸浮液在100度沸水浴中加熱10分鐘,然后在4度放置5分鐘,再在離心機上12000轉速離心20分,即可得到

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  • 王國祿2 2016-12-01 16:36:18
    DNA提取的幾種方法 (1).濃鹽法 利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同,將二者分離,常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提,得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩,使乳化,再離心除去蛋白質,此時蛋白質凝膠停留在水相及氯仿相中間,而DNA位于上層水相中,用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來. 也可用0.15 MNaCL液反復洗滌細胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白,再按氯仿---異醇法除去蛋白. 兩種方法比較,后種方法使核酸降解可能少一些. 以稀鹽酸溶液提取DNA 時,加入適量去污劑,如SDS可有助于蛋白質與DNA 的分離。在提取過程中為YZ組織中的DNase對DNA 的降解作用,在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉,并稱SSC溶液,提取DNA. (2).陰離子去污劑法: 用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質變性,可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質之間常借靜電引力或配位鍵結合,因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵,所以常用陰離子去污劑提取DNA. (3).苯酚抽提法: 苯酚作為蛋白變性劑,同時YZ了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時,由于蛋白與DNA 聯結鍵已斷,蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。離心分層后取出水層,多次重復操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性質,用乙醇沉淀DNA 。此時DNA是十分粘稠的物質,可用玻璃漫漫繞成一團,取出。此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態 . ( 4).水抽提法: 利用核酸溶解于水的性質,將組織細胞破碎后,用低鹽溶液除去RNA,然后將沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M.加入2倍體積95%乙醇,立即用攪拌法攪出.然后分別用66% ٠80%和95%乙醇以及丙銅洗滌,Z后在空氣中干燥,既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質含量較高,故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良,在提取過程中加入SDS.

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