今天是2019年的第yi個周一，從今天開始，安譜實驗微信公眾號將在每周一（法定節假日除外）準時發布一條干貨，力爭從用戶視角出發，用更多更全面的專業內容，為廣大實驗室科研人員搭建一個實用、專業的學習平臺，歡迎大家持續關注！

好了，現在就開始今天的干貨放送吧！

小柱“便秘”怎么辦？

在進入主題之前，先簡單介紹下固相萃取（SPE）技術。

固相萃取（Solid Phase Extraction，簡稱 SPE）技術，發展于上世紀 70 年代，由于其具有gao效、可靠、消耗試劑少等優點，在許多領域取代了傳統的液－液萃取而成為樣品前處理的有效手段， 在實驗室中得到了越來越廣泛的應用。它利用分析物在不同填料中被吸附的能力差將目標物提純，有效地將目標物與干擾物分離，大大增強對分析物，特別是痕量分析物的檢出能力，提高了被測樣品的回收率。

萬千世界的奇妙，造就了樣品基質的千差萬別，蔬菜，水果，肉蛋奶，水，土壤， 橡膠，紡織品等等，不管是食品還是環境的樣品，復雜程度也是各不相同。復雜程度一般的樣品可以用簡單提取作為前處理方法，但是對于特別復雜的樣品就需要經過特殊的前處理，比如用SPE 小柱，做進一步的凈化，把目標物和雜質分離，進而在色譜儀器上得到一個漂亮色譜圖，大家看現行的一些標準就會發現，有些樣品基質的前處理肯定是會用到 SPE 手段的。

在用到 SPE 前處理的時候，各位分析檢測工程師碰到最煩人最令人抓狂的問題是不是流速慢、流速不均、堵、下不去的情況；過小柱過到令人崩潰，既然流速都保證不了，怎么敢奢求回收率。

沒關系，安譜實驗憑借多年來在樣品前處理領域的深厚積累，教您幾招，治liao小柱“便秘”的難題。

SPE 的基本操作，包括活化、平衡、上樣、淋洗、洗脫，五個步驟。問題無外乎出現在這幾個步驟里面，別急，我們一個個過來看。

活化平衡

一般反相或者離子交換類型的小柱分別用到甲醇和水進行活化和平衡，正相小柱會用到石油醚或者正己烷來活化平衡。

1) 填料裝填過緊導致流速過慢。 可以通過加壓加快流速，或者購買對流速有嚴格質控廠家的產品解決，安譜實驗對 CNW 小柱每個批次的流速都有嚴格的質控范圍，質控范圍之外的小柱會被剔除。

2) 填料粒徑過小導致流速變慢。 比如同樣的活化溶劑下，100-200 目的 florisil 就會比60-100 目的更慢些。 可以根據樣品基質類型和使用習慣選擇合適規格的小柱。

3) 柱管體積差異。 500mg 3mL； 500mg 6mL， 這兩種規格形成的填料高度不一樣，顯然 500mg 6mL，直徑大，填料高度低，流速相對就快，就像地鐵站早高峰，閘口多，通過速率快，閘口少，自然就擁堵，通過速率慢。可根據樣品基質類型和使用習慣選擇合適柱管的小柱。

4) 溶劑順序加錯。對于反相類型小柱，如果不小心把水當成活化溶劑，就會出現流速很慢的問題，因為水對于疏水性反相填料的浸潤性是很差的，所以不小心把水當成甲醇來活化，可能等到花兒都謝了，它還是流不下來，注意別加錯哦。

5) 活化和平衡溶劑不互溶。比如二氯甲烷活化，水平衡小柱，大家就會發現，水加入后，流速也會慢到讓你崩潰。 這是因為水和二氯甲烷的互溶性差造成的，可以加入過渡溶劑甲醇來解決，甲醇既可以與二氯甲烷互溶也可以和水互溶。

6) 空氣進入填料。這個原因比較常見但也是比較難發現的原因， SPE 小柱是由篩板，填料，柱管組成，不是有機的整體，所以在運輸尤其是長途運輸的過程中，就會出現微小的松動，導致空氣進入填料，一般不容易被肉眼所發現。含有空氣的填料在氣壓的作用下導致活化溶劑流下速度很慢。說到這大家可能就容易理解為什么同一批次的小柱，會出現輕微的流速參差不齊的情況，可以用 SPE 裝置加正壓的方式抽掉空氣后，再一起加溶劑。

上樣

由于樣品基質的復雜性，篩板孔徑在 20um，在上樣之前需要把顆粒物給過濾掉，比如含蛋白的樣品需要加酸、鹽、有機溶劑、加熱等方式將蛋白處理掉；對于一般的基質，應采用過濾，離心或者高速離心，換大孔徑填料等方式進行處理，現在好多第三方檢測單位樣品量非常多，但是該做的前處理步驟不能省，否則對儀器的損壞，對數據的可靠性都會有一定的影響。

淋洗和洗脫

 一般在淋洗和洗脫這兩步出現流速慢的情形比較少，因為淋洗和洗脫都是不帶基質的純溶劑，一般上樣步驟沒有堵塞，就不會影響到淋洗和洗脫?？赡艹霈F流速慢的地方在于淋洗完小柱并干燥之后，因為一旦干燥小柱，就會使空氣進入填料，這就回到了活化平衡導致流速慢的第 6 個原因，只要稍微加壓就可以解決問題了。

當然我們在做實驗的時候，不是每個步驟都要求快，魯迅說過：欲速則不達，所以在小柱操作技巧里面，有兩個步驟是需要控制流速的， 分別是上樣和洗脫；這兩個過程是目標物與柱填料通過分子間作用力進行吸附和解吸附的過程，需要時間慢慢作用，大家一定要注意呦！

這一次干貨時間就為大家分享到這里，

下次再見！

　　本生教您如何選擇ELISA試劑盒的正確步驟

　　ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用，然而實驗新手們面對各種各樣、動則上上千種的ELISA試劑盒，內心應該是崩潰的。

　　各種廠家、品牌，各種種屬，各種因子，琳瑯滿目，質量良莠不齊，如何浪里淘金，選擇既符合研究需求，又品質上乘的 ELISA 試劑盒呢?

　　本生技術小編教你幾招，一眼“相中”、最合適的那個ELISA試劑盒!

　　首先，你要明確研究種屬：

　　一般來說，廠家都會在產品名稱上標明種屬，且為單詞，檢索種屬的常用語言為英文。

　　如果您需對不同物種的同一因子進行定量，建議優先尋找適用于多個種屬的 ELISA 試劑盒，產品介紹中會注明

　　其次，要明確樣本類型：

　　不同廠家驗證樣本類型不同，即使同一廠家不同試劑盒，其驗證樣本類型也不盡相同。特別是復雜的血漿樣本，根據樣本處理方式的差異，分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿，因此購買前需仔細核對。

　　第三步：要會預測自己的目標因子的濃度

　　一般來說，待測因子可以根據經驗或資料獲得參考的檢測范圍，且正常人與疾病狀態存在差異。如熱門炎癥因子 IL-6，正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL，病人會顯著，CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。

　　因而，必要時進行樣本的稀釋及選擇合適檢測范圍的試劑盒極其重要。

　　若濃度太低，可選擇高敏試劑盒;若不確定待測濃度或樣本間濃度差異較大，建議使用檢測動態范圍更寬的化學發光法ELISA試劑盒。

　　如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒，各類型檢測范圍差異較大，需要根據實際情況選擇合適的試劑盒。

　　第四步：檢查試劑盒進行過哪些質控

　　質控數據在說明書中即可找到，在購買前檢查試劑盒是否進行過嚴格的質控實驗，包括批次內(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實驗、線性稀釋實驗及交叉反應測試等，每個數據都看一下，確保的結果重現性及準確性。

　　第五步：確定需檢測的因子數量

　　如果待測因子超過 5 個，且樣本量較小時，單因子 ELISA 檢測方法并不是選擇。

　　建議考慮多因子檢測方法，如固相芯片(樣本數量一般 5 個以內，檢測指標可達上百個)及 Luminex 液相芯片方法 (檢測樣本多達 80 個，檢測指標多達 50 個)或微流控 ELISA 檢測系統 Ella。

　　可節約樣本及時間成本，也可保證檢測結果準確。

　　第六步：預算評估

　　預算往往是大家優先考慮的，實際上，不能夠一味講究產品價格，更需要考慮性價比。生物學是極其嚴謹的科學，一致性的實驗結果是基金、文章等評審過程中的因素，即使低廉的價格，不能夠重現結果，也是資源的另一種浪費。

　　本生ELISA檢測 本生一直視質量控制為企業的生命，追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業精神作為標準，以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創美好的未來。

摘要：本文使用上海光譜儀器有限公司生產的氫化物發生器SP HS-100和原子吸收分光光度計SP-3801，采用氫化發生原子吸收分析技術測定蔬菜中硒的含量，該方法的靈敏度為0.17ug/L，線性相關系數（0-40ug/L）大于0.999，RSD<3%（n=7），結果較滿意。

關鍵詞：氫化物原子吸收光譜法，氫化物發生器（SPHS100），蔬菜，硒

一.引言

硒是人體健康的必需元素，具有重要的生理功能，硒具有、抗氧化、增強人體免疫力和調節蛋白質的合成等功能?，F代醫學已經證明，每日補充200微克硒對健康人是安全和有效的，但人體攝入過多的硒對健康也有很大的危害，硒Z高膳食攝入400微克/天。過量的硒可引起中毒，表現為頭發變干變脆、易脫落，指甲變脆、有白斑及縱紋、易脫落，皮膚損傷及神經系統異常，嚴重者死亡。當硒缺乏的時候，就很容易導致人體免疫能力下降，威脅人類健康，生命的四十多種疾病都與人體缺硒有關，如癌癥、心血管病、肝病、白內障、胰臟疾病、糖尿病、生殖系統疾病等癥狀。氫化物原子吸收法測定硒方法簡單，靈敏度高，準確性好，結果較滿意。

二.實驗部分

儀器設備及試劑：

SP-3803火焰原子吸收分光光度計(上海光譜儀器有限公司)
SP-HS100全自動氫化物發生器 (上海光譜儀器有限公司)
KJ-100微波消解儀（上海屹堯科技）
TTL-10S超純水機（北京同泰聯科技發展有限公司）
BS-124-S電子天平（德國賽多利斯科學儀器公司）
硒元素空心陰極燈(河北寧強)
奶油生菜（星星美蔬）
硝酸、鹽酸、雙氧水，優級純（國藥集團上海化學試劑有限公司）
硼氫化鉀，氫氧化鈉，分析純（國藥集團上?；瘜W試劑有限公司）

測試條件如下：

表1 原子吸收儀器的測試條件

表2 氫化物條件

溶液配制：

硒標準溶液500mg/L：用移液槍移取10mL 1000mg/L的硒標準溶液于燒杯中，然后加入10mL濃鹽酸混勻，將燒杯放置在電熱板上加熱，待微沸數分鐘后取下冷卻至室溫，此溶液為500mg/L。

硒中間液50mg/L：用移液槍取500mg/L溶液5mL，用20%HCl定容至50mL。

硒標準使用液1mg/L：用移液槍取2mL硒中間液（50mg/L），用20%HCl定容至100mL，待用。

硒標準曲線的配制：用移液槍分別移取0、1.0、2.0、3.0、4.0mL的硒標準使用液，用20%HCl定容至100mL，此溶液為0， 10.0， 20.0， 30.0，40.0 ug/L。

1% KBH4：稱取1.5gNaOH和5.0g KBH4于燒杯中，加適量水溶解后轉移至500mL容量瓶中，加水定容至刻度，待用。

1%HCl：量取10mL鹽酸溶液至1000mL容量瓶中，加水定容至刻度，待用。

樣品制備與處理：

樣品用水洗凈，晾干，取可食部分，制成勻漿，儲于塑料瓶中。

微波消解：稱取0.8g已制備試樣于消化管中，加10mL硝酸、2mL過氧化氫，振搖混合均勻，于微波消解儀中消化，微波消化條件如下表所示，消解結束待冷卻后，將消化液轉移入錐形瓶中，加幾粒玻璃珠，在電熱板上加熱至近干。再加5mL鹽酸溶（6mol/L），繼續加熱至溶液變為清亮無色并伴有白煙出現，冷卻，轉移，用20%鹽酸定容至20mL，混勻待測，同時做試劑空白實驗。

表3 微波消解程序

三. 標準曲線

使用上海光譜有限公司研制的全自動氫化物發生器，該儀器采用原子吸收分光光度計與氫化物聯用測定硒。硒的標準曲線見圖1。

圖1 硒的標準曲線（0～40μg/L）

四. 測試結果（見表4）

表4 奶油生菜中硒含量的測試結果

五. 結論

1.使用上海光譜儀器有限公司研制的全自動氫化物發生器進行了初步的應用研究，在該裝置上進行了水質砷的含量的測定，儀器使用正常，結果滿意。

2.此方法校正曲線相關性大于0.999，方法的檢出限為0.17ug/L，相對標準偏差小于3.0%。

3.該儀器溫度、氣體流量可調，軟件自動化控制，操作方便、簡單。

（來源：上海光譜儀器有限公司）