參與評論

評論

登錄后參與評論

全部評論(1條)

• 

  櫻風旋律 2016-11-28 11:13:44

  測定酶活性ZX組成和結構是研究酶催化作用的重要課題。目前常用方法有：化學修飾法、反應動力學法、X－射線衍射法等。 1.化學修飾法：此方法是研究Z早，應用Z廣泛的方法。原則上講，酶分子側鏈上的各種基團，如羧基、羥基、巰基和咪唑基等均可由特定的化學試劑進行共價修飾。當它被某一化學試劑修飾后，若酶活性顯著下降或喪失，則可初步推斷該基團為酶的必需基團。 2.動力學分析法：酶蛋白是含有許多解離基團的兩性電解質，pH改變必然影響到解離基團的解離狀態，處于活性ZX基團的解離狀態的改變必然影響到酶的活性。因此，通過研究酶活性與pH關系，可以推測到與催化直接相關的某些基團的pK值，進而推測這些基團的作用。另外，改變反應溫度求出Vmax和Km與pH關系，從而求出有關基因解離的DH，DH的求得有助于補充pK值對活性ZX的判斷。在有機溶劑存在條件下，測定酶pK值與介電常數的關系，也有助于對活性部位的判斷。 3.X－射線衍射分析法：化學修飾法和動力學分析只能推斷酶活性部位氨基酸殘基的數目，活性ZX空間結構的信息，則需用X－射線衍射法。采用X射線衍射法在研究酶活性ZX空間構象時，通常是將酶與底物類似物或專一性YZ劑形成復合物，而后作X－射線衍射分析，從而得到有關酶活性ZX構象、酶與底物的接觸狀況以及催化機理的信息。 4.蛋白質工程：蛋白質工程是近年來發展的研究酶必需基團和活性ZX的Z先進的方法。蛋白質工程實質是按照人們的設想，通過改變基因來改變蛋白質的結構，制造新的蛋白質。利用基因定點突變技術將酶相應的互補DNA（cDNA）基因定點突變，突變的cDNA表達出被一個或幾個氨基酸置換的酶蛋白，再測定其活性就可以知道被置換的氨基酸是否為酶活性所必需。此方法可改變酶蛋白中任一氨基酸而不影響其他同類殘基和不引起底物和活性ZX結合的立體障礙，以及可人工地造成一個或幾個氨基酸的缺失或插入，了解肽鏈的縮短或延長對酶活性的影響和定點改變酶蛋白的糖基化位點或磷酸化位點，從而了解糖基化或磷酸化對酶結構和功能的影響。   

  贊(18)

  回復(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論