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2025-01-10 17:02:53分子生物學(xué)
分子生物學(xué)是研究生物大分子(如DNA、RNA和蛋白質(zhì))的結(jié)構(gòu)、功能及其相互作用的科學(xué)。它涉及遺傳信息的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯等過程,以及這些過程如何調(diào)控生物體的生長、發(fā)育、代謝和疾病發(fā)生等。分子生物學(xué)利用生物化學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多學(xué)科的知識和技術(shù),揭示生命現(xiàn)象的基本規(guī)律。在現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中,分子生物學(xué)扮演著至關(guān)重要的角色,為疾病診斷、治療和預(yù)防提供了理論基礎(chǔ)和實驗手段。

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2022-04-18 11:48:21一文帶你了解分子生物學(xué)研究技術(shù):聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)
1、什么是PCRPCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱,其是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA(或RNA)片段的分子生物學(xué)技術(shù)。這種技術(shù)模擬體內(nèi)DNA的天然復(fù)制過程,能將微量的DNA進(jìn)行特異性的擴(kuò)增,在短時間內(nèi)獲得足夠的DNA,是分子生物學(xué)研究中不可缺少的一員。2、標(biāo)準(zhǔn)PCR的過程此項技術(shù)是模擬DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,在整個PCR過程中包含了變性——退火(復(fù)性)——延伸三個基本反應(yīng)步驟。DNA變性(90℃-96℃):雙鏈DNA模板在熱作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈DNA。退火(復(fù)性)(40℃-65℃):系統(tǒng)溫度降低,引物與DNA模板結(jié)合,形成局部雙鏈。延伸(68℃-75℃):在Taq酶(在72℃左右最佳的活性)的作用下,以dNTP為原料,從引物的5′端→3′ 端延伸,合成與模板互補的DNA鏈。每一循環(huán)經(jīng)過變性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。3、為什么要使用梯度PCR儀呢梯度PCR儀是指一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件的儀器,因為不同的DNA片段其最適退火溫度不同,采用梯度PCR儀通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增就可以篩選出表達(dá)量高的最適退火溫度,優(yōu)化反應(yīng)條件,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。在理想狀態(tài)下,退火溫度足夠低,以保證引物同目的序列有效退火,同時還要足夠高,以減少非特異性結(jié)合。使用普通的PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增時,只能運行一個特定的退火溫度,當(dāng)目的基因的退火溫度不適時,就可能出現(xiàn)假陽性,影響實驗結(jié)果。而對于梯度PCR儀,不但可以作為普通PCR儀使用,也可以通過設(shè)置不同的溫度梯度(通常為12個梯度溫度),研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,有效降低或避免假陽性,同時在不理想的工作條件下擴(kuò)增出產(chǎn)物,既節(jié)約成本也提高了實驗效率。適用于分子生物學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、食品科學(xué)和農(nóng)學(xué)等領(lǐng)域,進(jìn)行分子克隆、基因表達(dá)分析、基因型鑒定、測序、病原微生物分析等實驗研究。識別下方二維碼 即可申請免費試 用
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