- 2025-01-21 09:35:37酵母雜交文庫構(gòu)建
- 酵母雜交文庫構(gòu)建是一種基于酵母細(xì)胞的分子生物學(xué)技術(shù)，用于高通量篩選基因間相互作用。該技術(shù)通過將感興趣的基因或基因片段克隆到酵母表達(dá)載體中，構(gòu)建成文庫，然后通過特定的雜交方法，使文庫中的基因與誘餌基因在酵母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并相互作用。通過篩選互作陽性的酵母克隆，可以快速鑒定出與目標(biāo)基因相互作用的候選基因，為后續(xù)的基因功能研究和藥物開發(fā)提供重要線索。
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- 酵母雜交技術(shù)作為研究基因、蛋白質(zhì)以及其他分子間相互作用的重要工具，在基因組學(xué)、功能基因組學(xué)及藥物開發(fā)等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。
酵母雜交文庫構(gòu)建產(chǎn)品
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酵母雜交文庫構(gòu)建問答
- 2023-06-16 14:28:25構(gòu)建表達(dá)載體想降本增效？看這一篇就夠了
- 想要開發(fā)有穩(wěn)定生產(chǎn)能力的細(xì)胞株，除了在細(xì)胞開發(fā)中對(duì)于細(xì)胞表達(dá)能力的評(píng)估篩選以外，前期的表達(dá)載體的構(gòu)建過程也非常重要。使用納升移液技術(shù)可以顯著提高細(xì)胞株過程基因合成，表達(dá)載體構(gòu)建以及轉(zhuǎn)染篩選等實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)效率，降低實(shí)驗(yàn)成本。聲波移液展示Echo?移液系統(tǒng)依靠專 利技術(shù)（U.S. Patent 6938995）和創(chuàng)新方法改變移液操作在整個(gè)生命科學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用。它采用動(dòng)態(tài)液體分析（Dynamic Fluid Analysis?, DFA）技術(shù)和聲波移液（Acoustic Droplet Ejection，ADE）技術(shù)，讓研究人員能夠移取多種不同類型的液體，完成微量小體積（2.5/25nL）的移液工作。全流程無需槍頭耗材，無交叉風(fēng)險(xiǎn)。納升移液技術(shù)讓細(xì)胞株構(gòu)建更快、更準(zhǔn)、更經(jīng)濟(jì)更快—— Echo快速任意孔到任意孔移液，極速基因組裝在質(zhì)粒構(gòu)建前期，需要非常多的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)，如基因組裝中將不同的DNA片段混合，在檢測(cè)反應(yīng)中將不同的樣本組合，在NGS文庫構(gòu)建過程中將多個(gè)文庫pooling到一起，在CRISPr基因編輯中構(gòu)建sgRNA文庫等等，這些實(shí)驗(yàn)都需要進(jìn)行快速、靈活的加樣移液，就算使用高通量的移液工作站，往往也要好幾小時(shí)才能完成。納升移液技術(shù)Echo的任意孔到任意孔的快速移液特點(diǎn)則讓此類應(yīng)用簡(jiǎn)單、快速化，每次轉(zhuǎn)移花費(fèi)更少時(shí)間更短。這為基因組裝節(jié)省了高達(dá)82%的時(shí)間。從母板任意孔轉(zhuǎn)移任意體積樣品到目標(biāo)板任意孔中，實(shí)現(xiàn)快速挑選、樣品混合和組合。有效縮短實(shí)驗(yàn)周期更準(zhǔn)—— Echo加樣精 準(zhǔn)，提高克隆效率利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進(jìn)行篩選，需要對(duì)篩選結(jié)果進(jìn)行鑒定， 而qPCR也是常用的鑒定方法之一。使用Echo納升移液技術(shù)進(jìn)行微量化克隆篩選鑒定，可以以更少的實(shí)際成本精 準(zhǔn)完成實(shí)驗(yàn)。使用Echo完成 qPCR的反應(yīng)體系構(gòu)建，通過減少每個(gè)組件的體積，并使用不使用tips的Echo，將反應(yīng)體積縮小10倍，從10 μL減少到1 μL，成本降低了8倍。精 準(zhǔn)減小實(shí)驗(yàn)體積更經(jīng)濟(jì)—— Echo微量化，縮小反應(yīng)體系，讓新技術(shù)更經(jīng)濟(jì)系統(tǒng)化的設(shè)計(jì)必然會(huì)帶來更大的樣本量，從而導(dǎo)致更高的費(fèi)用， Echo采用聲波的能量進(jìn)行無接觸式移液，且每滴液滴僅為2.5nL或25nL，因此可以直接省去吸頭耗材的消耗，也可以將檢測(cè)反應(yīng)體系降低4-100倍，使成本急劇下降。有效縮減試劑成本Gibson and Golden Gate Assembly實(shí)驗(yàn)：不同反應(yīng)體積的成本效益和組裝效率比較產(chǎn)品信息“僅用于科研，不用于臨床診斷”
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- 2023-01-10 12:42:52貝克曼庫爾特Biomek NGeniuS與IDT文庫制備自動(dòng)化解決方案
- 隨著基因組測(cè)序和數(shù)據(jù)分析方法的廣泛普及，越來越多的實(shí)驗(yàn)室正在探索下一代測(cè)序（Next-Generation Sequencing，NGS）作為研究工具的可行性。然而，NGS文庫的手動(dòng)制備過程單調(diào)乏味，根據(jù)所構(gòu)建文庫的類型而異，耗時(shí)從數(shù)小時(shí)到數(shù)天時(shí)間不等，并且操作過程中必須小心謹(jǐn)慎，以避免人工出錯(cuò)導(dǎo)致的制備失敗，浪費(fèi)寶貴樣本。Biomek NGeniuS系統(tǒng)是一款全自動(dòng)文庫制備系統(tǒng)，幫助我們從第 一步即確保正確無誤。DNA樣品上機(jī)，撥動(dòng)轉(zhuǎn)盤，按下按鈕，運(yùn)行過程無需值守，每批次可支持運(yùn)行4-24任意數(shù)量的樣品，是實(shí)驗(yàn)室追求靈活性和自動(dòng)化的理想之選。圖1 Biomek NGeniuS全自動(dòng)文庫制備系統(tǒng)IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit 便是一款支持自動(dòng)化的試劑盒。該試劑盒提供高一致性的文庫制備方法，獨(dú)特的兩步連接法能夠有效抑 制接頭二聚體和模板DNA自連，因而可有效提高文庫轉(zhuǎn)換率，尤其適用于cfDNA和FFPE等低質(zhì)量樣品，有助于研究人員發(fā)現(xiàn)和表征腫瘤樣品中出現(xiàn)的低頻變異位點(diǎn)。圖2 IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit工作流程我們使用Biomek NGeniuS系統(tǒng)對(duì)三種不同類型的樣品，cfDNA、FFPE和gDNA，分別構(gòu)建24個(gè)、10個(gè)和4個(gè)文庫。cfDNA 樣品所得文庫平均濃度為16.67ng/μL。cfDNA樣品連接后擴(kuò)增片段平均長度為362bp，長度分布一致且呈正態(tài)。與參考基因組相比，該樣品組從NGeniuS實(shí)驗(yàn)中獲得的所有文庫比對(duì)率為99.49%，配對(duì)的reads比對(duì)到參考基因組的比對(duì)率為99.84%。23份樣品中reads平均重復(fù)率為0.46%。圖3 以cfDNA為起始樣品，在Biomek NGeniuS 系統(tǒng)上使用IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit所制備文庫的分析結(jié)果。FFPE樣品構(gòu)建的文庫平均片段長度為378 bp，長度呈正態(tài)分布。與參考基因組相比，該樣品組從NGeniuS實(shí)驗(yàn)中獲得的所有文庫比對(duì)率為99.8%，配對(duì)的reads比對(duì)到參考基因組的比對(duì)率為99.84%。10份樣品中reads平均重復(fù)率為0.37%。圖4 以FFPE DNA為起始樣品，在Biomek NGeniuS 系統(tǒng)上使用IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit所制備文庫的分析結(jié)果。gDNA樣品制備的文庫平均片段長度為391bp，長度分布與 IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit 的預(yù)期一致。與參考基因組相比，該樣品組從 NGeniuS實(shí)驗(yàn)中獲得的所有文庫的比對(duì)率為99.2%，配對(duì)的reads比對(duì)到參考基因組的比對(duì)率為99.3%。3份樣品中reads平均重復(fù)率為0.56%。圖5 以gDNA為起始樣品，在Biomek NGeniuS 系統(tǒng)上使用IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit所制備文庫的分析結(jié)果。在Biomek NGeniuS全自動(dòng)文庫制備系統(tǒng)上使用IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep kit構(gòu)建文庫，所得文庫片段大小分布一致，并符合IDT xGen cfDNA & FFPE DNA Library Prep Kit說明書建議的文庫大小范圍。對(duì)三種不同濃度的樣品重復(fù)進(jìn)行測(cè)序，結(jié)果表明，平均文庫大小為362~391bp。所獲文庫比對(duì)率>99.2%，配對(duì)的reads比對(duì)到參考基因組的比對(duì)率>99.3%，重復(fù)率
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- 2022-11-21 10:19:06“沃”的實(shí)驗(yàn) | 13份動(dòng)物模型構(gòu)建方法系列資料上新，造模不再難！
- 在做基礎(chǔ)研究時(shí)加入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不僅會(huì)使研究工作更完善，也會(huì)提高投稿的命中率，但是想把實(shí)驗(yàn)做成功卻不是件容易的事兒，因?yàn)樵趧?dòng)物造模中總遇到各種難題：搞不清動(dòng)物建模標(biāo)準(zhǔn)化的流程，做起實(shí)驗(yàn)磕磕絆絆造模需要注意的細(xì)節(jié)多，反復(fù)摸索十幾遍才造模成功明明按照文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)方法造模，卻還老是不成功“沃”的實(shí)驗(yàn)全網(wǎng)最全的生命科學(xué)研究線上學(xué)習(xí)平臺(tái)第二期內(nèi)容：常見疾病動(dòng)物模型——構(gòu)建方法系列2幫助大家解決造模中遇到的難題第二期內(nèi)容有什么？“沃”的實(shí)驗(yàn)——全網(wǎng)最全的生命科學(xué)研究線上學(xué)習(xí)平臺(tái)第二期內(nèi)容，為大家分享常見疾病動(dòng)物模型構(gòu)建方法，涵蓋8大視頻課程+2大實(shí)驗(yàn)手冊(cè)+3大建模的標(biāo)準(zhǔn)操作流程。5位老師線上為你講解不同動(dòng)物模型的背景、造模方法等內(nèi)容，理論結(jié)合實(shí)踐，希望能給大家的動(dòng)物建模帶來更多新思路和新靈感。點(diǎn)擊鏈接，即可進(jìn)入學(xué)習(xí) 8大視頻課程 2大實(shí)驗(yàn)手冊(cè) 3大建模的標(biāo)準(zhǔn)操作流程歡迎大家收藏「“沃”的實(shí)驗(yàn)」線上學(xué)習(xí)平臺(tái)學(xué)習(xí)平臺(tái)，內(nèi)容將持續(xù)更新下期內(nèi)容預(yù)告： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物手術(shù)操作-手術(shù)方法
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- 2022-04-18 13:45:53Neuron：北大李毓龍課題組構(gòu)建一種全新的ATP熒光探針
- 文章概述三磷酸腺苷（Adenosine 50-triphosphate，ATP）是一種廣泛存在于體內(nèi)的能量存儲(chǔ)分子。除了參與細(xì)胞內(nèi)的能量代謝功能外，越來越多的證據(jù)表明，釋放到細(xì)胞外空間的ATP可以作為一種分子信號(hào)（嘌呤能遞質(zhì)），能夠結(jié)合并激活離子型P2X受體以及代謝型P2Y受體。在神經(jīng)系統(tǒng)中，釋放的ATP參與了多中生理病理過程，包括痛覺感受、機(jī)械/化學(xué)感知信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、突觸傳遞、損傷、炎癥等。對(duì)于ATP在這些生理過程中的作用，目前的研究并未完全闡明。為了進(jìn)一步研究ATP的生理功能，2021年12月22日，北京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院李毓龍教授團(tuán)隊(duì)發(fā)表在《Neuron》期刊上發(fā)表題為“A sensitive GRAB sensor for detecting extracellular ATP in vitro and in vivo”的研究論文，該項(xiàng)工作展示了團(tuán)隊(duì)最新開發(fā)的一種可遺傳編碼的熒光分子探針——GRABATP1.0（簡(jiǎn)稱ATP1.0；GRAB：G protein-coupled receptor activation-based sensors），該探針以P2Y受體作為ATP的結(jié)合支架，能夠?qū)?xì)胞外的ATP進(jìn)行高靈敏度、高選擇性以及高時(shí)空分辨率的實(shí)時(shí)測(cè)量。該項(xiàng)工作是李毓龍教授團(tuán)隊(duì)在相繼開發(fā)了乙酰膽堿、多巴胺、去甲腎上腺素、血清素和腺苷等一系列分子探針之后的后又一重要成果，對(duì)于我們深入研究并理解ATP的生理功能具有重要意義。核心觀點(diǎn)1、ATP1.0是一個(gè)可遺傳編碼的細(xì)胞外ATP感受器；2、ATP1.0對(duì)于細(xì)胞外ATP具有高敏感性和高時(shí)空分辨率；3、ATP1.0可用于離體以及在體ATP釋放的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。研究結(jié)果分析1. ATP1.0表現(xiàn)出卓越的細(xì)胞外ATP檢測(cè)性能為了開發(fā)一個(gè)遺傳編碼的ATP熒光探針，研究者首先系統(tǒng)地篩選了能夠被ATP激活的G蛋白耦合受體（G protein-coupled receptors, GPCRs），包括人源的P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y11、P2Y12和P2Y13等。以這些GPCRs作為支架，研究者將結(jié)構(gòu)敏感的綠色熒光蛋白（circularly permuted enhanced GFP, cpEGFP）插入到這些受體結(jié)構(gòu)中。其中hP2Y1在插入cpEGFP后表現(xiàn)出最佳的膜轉(zhuǎn)運(yùn)和對(duì)ATP的響應(yīng)性，因此隨后研究者選擇了基于hP2Y1的嵌合體ATP0.1進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化，并且最終得到了對(duì)ATP熒光響應(yīng)性最 好的ATP1.0。當(dāng)ATP1.0在HEK293T細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，它能夠很好的被運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞膜上表達(dá)，并對(duì)細(xì)胞外100mM的ATP產(chǎn)生一個(gè)~500%的dF/F0峰值。在特異性方面，ATP1.0對(duì)細(xì)胞外ATP的反應(yīng)能夠被P2Y1的拮抗劑MRS-2500阻斷。ATP1.0對(duì)其它遞質(zhì)不會(huì)產(chǎn)生反應(yīng)，包括谷氨酸、GABA、甘氨酸、多巴胺、去甲腎上腺素、血清素、組胺和乙酰膽堿等，對(duì)二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate, ADP）的反應(yīng)與ATP類似，但是對(duì)于其它結(jié)構(gòu)類似的嘌呤能分子或衍生物，如一磷酸腺苷、腺苷、二磷酸尿核苷等幾乎不產(chǎn)生反應(yīng)。ATP1.0的反應(yīng)具有快速動(dòng)力學(xué)的特征，其反應(yīng)平均上升時(shí)間常數(shù)約為28 ms，平均衰減時(shí)間常數(shù)約為283 ms。在熒光強(qiáng)度上，ATP1.0被ATP激活時(shí)的亮度達(dá)到了直接表達(dá)hP2Y1-EGFP融合蛋白熒光強(qiáng)度的64%，并且ATP1.0在單光子激發(fā)下的光譜與EGFP相似，激發(fā)峰在500 nm，發(fā)射峰在520 nm。在與其它細(xì)胞外ATP分子探針的比較中，ATP1.0表現(xiàn)出更大的動(dòng)態(tài)檢測(cè)范圍、更強(qiáng)的熒光反應(yīng)、以及更低的信噪比。接下來，研究者探討了ATP1.0在原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元中的表達(dá)能力以及反應(yīng)性。ATP1.0能夠廣泛的表達(dá)到星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的細(xì)胞上，包括胞體、突起等部位。表達(dá)到星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元上的ATP1.0對(duì)細(xì)胞外ATP均有較好的反應(yīng)，其平均dF/F0峰值分別約為1000%和780%。此外，ATP誘導(dǎo)的熒光反應(yīng)也能夠被P2Y1、受體拮抗劑MRS-2500阻斷。此外，與HEK293T中結(jié)果相似，神經(jīng)元中表達(dá)的ATP1.0對(duì)ATP和ADP均有反應(yīng)，但對(duì)一磷酸腺苷、腺苷、二磷酸尿核苷均無反應(yīng)。更重要的是，ATP1.0在細(xì)胞表面非常穩(wěn)定，在給予10mM 的ATP 兩小時(shí)后，表達(dá)ATP1.0的神經(jīng)元的熒光沒有出現(xiàn)明顯下降。綜上所述，ATP1.0能夠適用于多種類型的細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞外的ATP產(chǎn)生高靈敏度、高選擇性和高穩(wěn)定性的熒光增強(qiáng)反應(yīng)。2. ATP1.0可用于監(jiān)測(cè)體外培養(yǎng)細(xì)胞外的ATP水平接下來，研究者測(cè)試了ATP1.0是否能夠用于檢測(cè)神經(jīng)-膠質(zhì)共培養(yǎng)細(xì)胞中內(nèi)源性ATP的釋放。在大腦中，機(jī)械刺激和細(xì)胞腫脹均能誘發(fā)胞內(nèi)ATP被釋放。在表達(dá)ATP1.0的細(xì)胞中，給予細(xì)胞機(jī)械刺激（利用玻璃微電極按壓某個(gè)細(xì)胞），能夠引起一個(gè)快速、局部增強(qiáng)的dF/F0信號(hào)，反映了ATP的釋放。為了誘導(dǎo)細(xì)胞腫脹，研究者將細(xì)胞浸泡在低滲溶液（130 mOsm/kg）中;在1min內(nèi)，dF/F0信號(hào)顯著增加。并且在應(yīng)用MRS-2500后，這兩種刺激引起的反應(yīng)都被完全抑制。研究者還發(fā)現(xiàn)，低滲刺激誘導(dǎo)的ATP釋放可能不需要依賴經(jīng)典的SNARE囊泡釋放機(jī)制，因?yàn)榧?xì)胞表達(dá)了破傷風(fēng)毒素輕鏈（tetanus toxin light chain, TeNT，可以切割突觸短肽并阻止胞外分泌過程），但是對(duì)低滲刺激誘導(dǎo)的反應(yīng)沒有影響；而作為對(duì)照，表達(dá)TeNT阻斷了低滲刺激誘發(fā)的谷氨酸釋放。除了刺激誘發(fā)的ATP釋放外，研究者還觀察到，即使在沒有外部刺激的情況下，神經(jīng)-膠質(zhì)共培養(yǎng)細(xì)胞中也存在自發(fā)、局部、以及短暫的ATP1.0信號(hào)。在1.6mm2成像視野中，這些自發(fā)事件以1.2次/min的速率出現(xiàn)，其dF/F0的平均峰值約為210%。ATP自發(fā)釋放的平均上升時(shí)間約為11s，衰減時(shí)間約為43s，其釋放范圍的平均直徑約為32mm。為了確保ATP1.0信號(hào)反映了細(xì)胞外的ATP動(dòng)態(tài)變化，研究者利用三磷酸腺苷雙磷酸酶（ATP的水解酶）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理并成像，觀察到三磷酸腺苷雙磷酸酶能夠顯著阻斷自發(fā)事件的發(fā)生。與以前的檢測(cè)手段相比，ATP1.0具備更高的靈敏度，能夠在普通條件下特異性的檢測(cè)ATP的釋放。3. ATP1.0可用于監(jiān)測(cè)斑馬魚幼體中ATP的動(dòng)態(tài)變化在證明了ATP1.0可用于體外ATP的檢測(cè)后，研究者接著探討了它是否可以用于監(jiān)測(cè)體內(nèi)（如斑馬魚中）ATP的動(dòng)態(tài)變化。在斑馬魚幼體神經(jīng)元中特異性地表達(dá)ATP1.0后，利用ATP局部處理會(huì)引起視頂蓋中dF/ F0信號(hào)出現(xiàn)強(qiáng)烈的瞬時(shí)增加，這些信號(hào)能夠被MRS-2500阻斷。在驗(yàn)證了ATP1.0能夠?qū)ν庠碅TP做出反應(yīng)后，研究者進(jìn)一步探討了ATP1.0是否能夠用于檢測(cè)活斑馬魚內(nèi)源性ATP的釋放。ATP信號(hào)在促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向損傷部位遷移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。在表達(dá)ATP1.0的斑馬魚中，研究者發(fā)現(xiàn)激光消融誘導(dǎo)視頂蓋損傷后會(huì)導(dǎo)致熒光增強(qiáng)，其反應(yīng)從損傷部位向外呈放射狀傳播。損傷后11s和64s釋放ATP的范圍，其平均直徑分別為~23mm和~34mm。接下來，研究者通過在斑馬魚的視頂葉中表達(dá)ATP1.0，同時(shí)監(jiān)測(cè)ATP的釋放和小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，斑馬魚的小膠質(zhì)細(xì)胞用紅色熒光蛋白DsRed標(biāo)記。研究者們發(fā)現(xiàn)，在激光消融后，小膠質(zhì)細(xì)胞沿著ATP傳播路徑逐漸遷移到損傷部位。因此，ATP1.0非常適用于活體斑馬魚幼蟲ATP監(jiān)測(cè)，并且具有較高的時(shí)空分辨率。4. ATP1.0可用于監(jiān)測(cè)小鼠全身炎癥引起的ATP局部釋放ATP是應(yīng)對(duì)機(jī)體急慢性炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵細(xì)胞外信使，但是在全身炎癥期間ATP釋放的模式還不清楚。研究者在小鼠腹腔注射細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharides, LPS）誘導(dǎo)全身炎癥，并通過雙光子顯微鏡來觀察直接觀察視覺皮層ATP1.0的熒光反應(yīng)。注射LPS 24小時(shí)后，研究者觀察到皮質(zhì)內(nèi)多次ATP局部釋放事件，在記錄的20min內(nèi)，其發(fā)生頻率約為5 – 10次/min。在星形膠質(zhì)細(xì)胞中，ATP釋放的上升時(shí)間相對(duì)較快（
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- 2022-05-19 15:21:24線栓法構(gòu)建的局灶性腦缺血模型，你會(huì)么？
- 為什么要構(gòu)建局灶性腦缺血模型？世衛(wèi)組織《2020全 球衛(wèi)生估計(jì)》統(tǒng)計(jì)顯示，2019年10大死亡原因中有7個(gè)是非傳染性疾病。其中，中風(fēng)是第二大死亡原因，占總死亡人數(shù)的11%。中風(fēng)，又稱“腦卒中”、“腦血管意外”，是一種急性腦血管疾病，包括缺血性和出血性卒中，其中缺血性腦血管病占60-70%。缺血性腦血管病嚴(yán)重危害人類的健康，建立一種與人腦梗塞類似的動(dòng)物模型使之適合溶栓治療研究具有重要的研究意義和實(shí)用價(jià)值。卒中又名大腦中動(dòng)脈栓塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO），是一種局灶性腦缺血模型，也是目前應(yīng)用最廣泛的腦缺血模型。其發(fā)病機(jī)理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對(duì)于制作模擬人腦缺血模型對(duì)腦缺血發(fā)病機(jī)制及藥物篩選有重要意義。如何構(gòu)建局灶性腦缺血模型？構(gòu)建局灶性腦缺血模型方式有很多種，栓塞法、線栓法及光化學(xué)方法等。小沃今天就教你如何運(yùn)用 線栓法 建立一個(gè)完美的局灶性腦缺血模型。認(rèn)識(shí)線栓法Koizumi于日本卒中會(huì)議(1985)首次報(bào)道了可逆性MCAO模型，解決了大鼠局灶腦缺血再灌流損傷研究的難題。分離暴露頸部血管，從ECA或CCA分叉處插入4～0尼龍線，進(jìn)入ICA，阻斷MCA起始端及其所有側(cè)支血液供應(yīng)，導(dǎo)致MCA區(qū)局灶缺血。一定時(shí)間后輕輕提拉插線，有阻力時(shí)提示絲線頭端已達(dá)ECA或CCA切口處，制做成再灌流模型，不需再次切開頸部。線栓法分類目前該模型具有代表性的方法有兩類，即Longa法川和Koizumi法。前者是把尼龍線頭端燒成球形，后者在尼龍線遠(yuǎn)端徐一層硅酮彈性體（長度5 mm，直徑0.25 mm），便于插入ICA并脹緊血管。Laing對(duì)上述兩種方法做了對(duì)比研究，發(fā)現(xiàn)兩者腦缺血中心區(qū)細(xì)胞壞死和腦血流改變相差顯著，Koizumi法閉塞效果更好。線栓法優(yōu)點(diǎn)線栓法的優(yōu)點(diǎn)在于模型制作不用開顱，MCAO效果也比較理想，是目前普遍使用的能觀察再灌流損傷的局灶性腦缺血模型。線栓法實(shí)操詳細(xì)解說用線栓法建立局灶性腦缺血模型的每一個(gè)流程，長按圖片還可直接保存流程圖。圖文演示，讓你的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)不再困難。
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