- 2025-04-25 14:14:09酶標(biāo)記抗體
- 酶標(biāo)記抗體是一種生物技術(shù)產(chǎn)品，通過將酶分子與抗體分子結(jié)合而成。這種結(jié)合保留了抗體的免疫活性及酶的催化活性，可用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等免疫學(xué)檢測方法中。酶標(biāo)記抗體能夠特異性地識別并結(jié)合目標(biāo)抗原，同時(shí)其結(jié)合的酶可催化底物顯色，從而實(shí)現(xiàn)對目標(biāo)抗原的定性或定量檢測，具有高度的特異性和敏感性。
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酶標(biāo)記抗體問答
- 2021-09-01 11:46:11化學(xué)發(fā)光試劑吖啶酯在抗體蛋白上的標(biāo)記
- 診斷試劑中化學(xué)發(fā)光底物吖啶酯的標(biāo)記原理化學(xué)發(fā)光免疫檢測中，我們用吖啶酯先標(biāo)記上抗體蛋白，才能在免疫反應(yīng)后對待測物進(jìn)行檢測，因此如何標(biāo)記抗體就非常的關(guān)鍵了。吖啶鹽和相關(guān)化合物已被廣泛證明為非常有用的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，其穩(wěn)定性、標(biāo)記特異性和檢測靈敏度都超越放射性同位素。吖啶酯-NHS即吖啶琥珀酰亞胺酯(本試劑盒所提供)能與蛋白質(zhì)的一級氨基發(fā)生反應(yīng)。在堿性條件下，NHS作為離去基團(tuán)被取代，蛋白質(zhì)與吖啶酯形成穩(wěn)定的酰胺鍵。反應(yīng)完成后，多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在堿性過氧化氫存在下，吖啶標(biāo)記的蛋白不需要酶催化就可自行發(fā)光。因此激發(fā)液的加入導(dǎo)致反應(yīng)體系立即釋放約430nm的光子，通過使用標(biāo)準(zhǔn)光度計(jì)luminometer計(jì)數(shù)光子數(shù)量就可檢測蛋白質(zhì)的濃度。因?yàn)榇税l(fā)光過程是十分短暫(整個(gè)過程在2秒鐘內(nèi)完成)，樣品必須直接放在光度計(jì)內(nèi)部光子探測器前面。蛋白質(zhì)、多肽、抗體、核酸都可以用吖啶酯標(biāo)記。化學(xué)發(fā)光試劑這里需要注意的是，溶解吖啶琥珀酰亞胺酯時(shí)，使用的DMF必須嚴(yán)格無水，防止吖啶酯水解不使用時(shí)，干燥密封-20°℃保存。針對傳統(tǒng)吖啶酯，在其結(jié)構(gòu)上進(jìn)行了修飾，增大了位阻，增強(qiáng)了抗水解性。如在室溫下，在pH為7.0的PB緩沖液中很穩(wěn)定。如果是不含-NHS的吖啶羧酸需要加入縮合劑EDCI等，才能與含胺基的蛋白發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。吖啶酰肼，含有游離氨基，吖啶酰肼末端適用直接偶聯(lián)含有醛基的多糖核酸或者蛋白質(zhì)等。德晟自05年就開始研發(fā)生產(chǎn)血液檢測體外診斷方面試劑，對新型Trinder's試劑、生物緩沖劑及化學(xué)發(fā)光試劑有著較深的研究,專業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和生產(chǎn)設(shè)備，目前，公司的生產(chǎn)設(shè)備、工藝和流程都是新升級的。每一件產(chǎn)品都經(jīng)過專業(yè)質(zhì)量人員檢測認(rèn)證，確保產(chǎn)品質(zhì)量。可以放心購買。歡迎詢價(jià)。
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- 2023-12-25 17:14:18重組抗體的類型有哪些？
- 重組抗體，也被稱為重組免疫球蛋白，是通過基因工程技術(shù)將抗體的基因在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)并生產(chǎn)出來的一類抗體。與傳統(tǒng)的多克隆抗體和單克隆抗體相比，重組抗體具有更高的特異性和親和力，并且可以針對特定的抗原表位進(jìn)行設(shè)計(jì)和優(yōu)化。重組抗體的類型包括嵌合抗體、雙特異性抗體、抗體片段和Fc融合蛋白等。下面一起來看一下他們各種的應(yīng)用：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview①嵌合抗體1975年，雜交瘤技術(shù)的發(fā)現(xiàn)徹底改變了抗體研究和臨床開發(fā)。然而，鼠源性抗體的療-效受到人抗鼠抗體（HAMA）效應(yīng)的限制，鼠源性單抗對人體具有異種蛋白的免疫原性 ,在人體內(nèi)半衰期較短。1984年，研究人員通過基因工程構(gòu)建了第一個(gè)嵌合抗體，也是公認(rèn)的第一種重組抗體，以降低鼠源抗體在人體內(nèi)的免疫原性。其中，約30%-35%的分子來源于小鼠的抗體序列，約65%-70%來源于人的抗體序列。所得嵌合抗體保留了親代小鼠抗體的抗原結(jié)合能力。抗體嵌合是開發(fā)治-療性人源化抗體的第一步。義翹神州采用CDR移植技術(shù)和計(jì)算機(jī)輔助分子建模，提供高質(zhì)量的單克隆抗體人源化服務(wù)，成功率高，人源化程度>90%。②抗體片段每一個(gè)完整的免疫球蛋白（IgG）分子包含通過二硫鍵連接的兩條重鏈和兩條輕鏈。抗體片段（如Fab、scFv和VHH）體積小，比其全長抗體具有更好的組織或腫瘤穿透力。因此，它們在免疫治-療方面具有巨大的前景，尤其是在實(shí)體瘤方面。此外，它們的半衰期也較短，可用作放射性顯像劑。然而，由于缺乏Fc區(qū)，它們不能引起Fc介導(dǎo)的抗體效應(yīng)功能，如抗體依賴性細(xì)胞毒性（ADCC）和補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性（CDC）。起初采用酶解法對IgG抗體進(jìn)行片段化。胃蛋白酶作用于鉸鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C端，水解產(chǎn)生被稱為F(ab’)2的二價(jià)Fab片段。然后，通過木瓜蛋白酶將該片段裂解為兩個(gè)相同的Fab片段。然而，酶解法限制了可制備的抗體片段類型，而且不適合工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)和純化。隨著抗體工程技術(shù)的進(jìn)步，這些問題可以通過重組生產(chǎn)抗體片段來解決。抗體基因克隆測序成功后，可通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染在原核表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌）和哺乳動(dòng)物系統(tǒng)（HEK293細(xì)胞）中表達(dá)抗體片段。憑借豐富的重組生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，義翹神州建立了高通量VHH表達(dá)平臺，交付了多個(gè)VHH抗體生產(chǎn)項(xiàng)目，總體成功率超過90%。除了常見的VHH形式，我們還可以表達(dá)雙特異和多特異VHH。此外，義翹神州還可以表達(dá)其他各種高特異性和親和力的抗體片段，如scFv和Fab。③雙特異性抗體與常規(guī)單克隆抗體不同，雙特異性抗體（bsAb）具有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，可識別同一抗原上兩個(gè)不同抗原或表位。由于這一特性，雙特異性抗體備受研究者和制藥業(yè)的關(guān)注。截止目前，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）已批準(zhǔn)了4種雙抗藥物，而且160多種雙抗正在進(jìn)行臨床試驗(yàn)，用于治-療癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和其他疾病。起初，雙特異性抗體通過四源雜交瘤技術(shù)制備，但這對下游抗體生產(chǎn)和純化構(gòu)成了巨大的挑戰(zhàn)。隨著過去20年重組DNA技術(shù)的發(fā)展，出現(xiàn)了幾種雙特異性抗體形式，以適應(yīng)所需的靶標(biāo)-產(chǎn)品特征。為了解決重鏈錯(cuò)配問題，Genentech首先提出了“knob-into-hole”（KiH）技術(shù)，該技術(shù)通過對CH3結(jié)構(gòu)域進(jìn)行改造，在每條重鏈中創(chuàng)建一個(gè)“knob”或一個(gè)“hole”，以誘導(dǎo)異源二聚化。同樣地，研究人員也采用了common light chain 和CrossMab等其他技術(shù)來解決輕鏈錯(cuò)配問題。表達(dá)雙特異性抗體主要在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行。由于單克隆抗體和雙特異性抗體之間的各種結(jié)構(gòu)相似性，許多已建立的常規(guī)單抗純化工藝也可適用于雙特異性抗體。（參見另一篇文章：“雙特異性抗體：抗體治-療中的新星”）④Fc融合蛋白Fc融合蛋白（又稱Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc標(biāo)簽蛋白）是一種同源二聚體，由免疫球蛋白的Fc段與具有生物學(xué)活性的蛋白分子組成。雖然單克隆抗體是治-療性生物制劑開發(fā)的重-點(diǎn)，但Fc融合蛋白也是一類成功的生物制藥產(chǎn)品，至少有13種藥物獲得了歐洲藥品管理局（EMA）和美國FDA的批準(zhǔn)。除治-療應(yīng)用外，F(xiàn)c融合蛋白還是基礎(chǔ)研究中的檢測試劑，包括流式細(xì)胞術(shù)、免疫組織化學(xué)和蛋白結(jié)合試驗(yàn)。事實(shí)上，與Fc區(qū)的連接可以提高一些結(jié)合蛋白的溶解度和穩(wěn)定性。鑒于其大小和對糖基化的需求（大多數(shù)是糖蛋白），F(xiàn)c融合蛋白主要在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。目前，抗體工程技術(shù)取得了一定的進(jìn)步，這極大地促進(jìn)了各種形式重組抗體的開發(fā)，用于疾病治-療。FDA已批準(zhǔn)了100多種抗體藥物，目前有多種抗體處于臨床后期開發(fā)階段。此外，重組抗體還可用于許多研究應(yīng)用：蛋白免疫印跡（WB）、免疫組織化學(xué)（IHC）、免疫熒光（IF）、流式細(xì)胞術(shù)（FC）和表面等離子體共振（SPR）。總之，重組抗體是基因工程技術(shù)的重要應(yīng)用之一，其類型多樣，具有廣泛的應(yīng)用前景。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，重組抗體的生產(chǎn)成本和安全性問題也將得到進(jìn)一步優(yōu)化，為臨床治-療和科學(xué)研究提供更多有效的工具。同時(shí)，我們也應(yīng)該認(rèn)識到重組抗體的潛在風(fēng)險(xiǎn)和挑戰(zhàn)，加強(qiáng)對其安全性和有效性的評估和監(jiān)管，以確保其能夠更好地服務(wù)于人類的健康事業(yè)。更多重組抗體詳情關(guān)注：https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats
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- 2024-01-16 16:35:20免疫組化抗體（IHC）的實(shí)踐應(yīng)用與常見問題詳解
- 免疫組化法（IHC）是使用抗體檢測組織切片（例如肝臟、胰-腺或心臟）中細(xì)胞蛋白質(zhì)（抗原）的過程。 當(dāng)組織樣本被送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行疾病檢查時(shí)，有幾個(gè)細(xì)節(jié)不易確定。幾種疾病或疾病亞型在顯微鏡下可能看起來相似或看起來具有相似大小的細(xì)胞，但具有不同的行為和必要的治-療，區(qū)分它們的最佳方法是檢測這些細(xì)胞上作為標(biāo)記的特定分子。免疫組化法（IHC）是一種使用抗體（匹配分子）的技術(shù)，用于尋找、識別附著在細(xì)胞上的標(biāo)記物。在顯微鏡下可以看到抗體本身，這有助于技術(shù)人員進(jìn)行精確識別。 免疫組化法（IHC）已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)中，特別是癌癥診斷。淋巴瘤是依賴于IHC進(jìn)行正確診斷和治-療決策的癌癥之一。 免疫組化常見問題：問題一：我應(yīng)該使用PIER還是HIER進(jìn)行抗原修復(fù)？ 固定過程可能會掩蓋抗原，導(dǎo)致抗體結(jié)合無法進(jìn)行。這種掩蓋可以通過一種稱為抗原修復(fù)/抗原去掩蔽的技術(shù)來逆轉(zhuǎn)，該技術(shù)可以通過加熱（HIER；熱誘導(dǎo)抗原修復(fù)）或蛋白酶（PIER；蛋白水解誘導(dǎo)抗原修復(fù)）介導(dǎo)。后者使用蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。PIER方法通過降解掩蓋表位的肽而起作用。然而，PIER也可能導(dǎo)致樣品形態(tài)或抗原本身的改變。因此，PIER的使用頻率低于HIER，后者通過恢復(fù)表位的二級和三級結(jié)構(gòu)而起作用。為了確定是否應(yīng)該進(jìn)行抗原修復(fù)以及采用哪種方法，應(yīng)遵循以下指南：進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，以確定其他研究人員如何可視化您感興趣的抗原。檢查抗體供應(yīng)商是否推薦了特定的抗原修復(fù)-方案。如果沒有特定的協(xié)議可用，我們建議使用HIER而不是PIER協(xié)議。對于HIER，總是使用中性抗原修復(fù)緩沖液，并與未進(jìn)行抗原修復(fù)的樣品進(jìn)行比較。如果中性染色溶液沒有產(chǎn)生良好的染色效果，則應(yīng)測試堿性或酸性抗原修復(fù)緩沖液。除了pH值外，其他需要優(yōu)化的參數(shù)是溫度和持續(xù)時(shí)間。理想情況下，嘗試各種pH值、溫度和時(shí)間組合。為了排除由HIER過程引起的偽影，始終包括一個(gè)控制樣品，該樣品在沒有HIER步驟的情況下進(jìn)行染色。 問題二：如何選擇IHC實(shí)驗(yàn)的抗體，單克隆抗體還是多克隆抗體？ 單克隆抗體和多克隆抗體的抗體特性決定了其優(yōu)缺點(diǎn)。單克隆抗體是針對單個(gè)表位的同種免疫球蛋白。抗體是由一個(gè)動(dòng)物的單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，因此在免疫化學(xué)上相似。多克隆抗體是針對同一抗原的各種表位的異質(zhì)抗體混合物。抗體是由動(dòng)物的不同B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，因此在免疫化學(xué)上不同。多克隆混合物中的抗體可能具有略微不同的特異性和親和力。 如果蛋白質(zhì)靶標(biāo)具有相同的氨基酸序列，單克隆抗體更合適。一旦抗原因各種原因發(fā)生構(gòu)象變化，如蛋白質(zhì)相互作用、翻譯后修飾、溫度、pH值、固定、鹽濃度等，單克隆抗體和抗原的聯(lián)合作用將受到嚴(yán)重影響。由于多克隆抗體具有多個(gè)表位，不受蛋白質(zhì)構(gòu)象變化的影響，一般來說，在一定范圍內(nèi)的pH和鹽濃度內(nèi)，多克隆抗體之間的抗原結(jié)合比單克隆抗體更穩(wěn)定。 問題三：一抗的孵育時(shí)間多久？一抗的孵育時(shí)間與溫度,抗體濃度有關(guān)。一般情況下,在37℃的條件下,孵育1-2小時(shí)左右。在室溫的條件下,孵育3小時(shí)左右。在4℃的條件下,孵育18-24小時(shí)左右。 義翹神州提供石蠟切片免疫組化（IHC）檢測服務(wù)，更多免疫組化的問題可以上義翹神州網(wǎng)咨詢！https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service
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- 2022-07-22 15:27:25熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，熒光標(biāo)記怎么選？
- 熒光定量PCR技術(shù)是將常規(guī)的PCR和熒光檢測技術(shù)相結(jié)合，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，以此實(shí)現(xiàn)對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術(shù)作為當(dāng)今生物學(xué)研究的重要手段之一，在基礎(chǔ)科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)研究、法醫(yī)學(xué)、診斷學(xué)等多方面具有廣泛的應(yīng)用前景。說到熒光定量PCR技術(shù)，我們經(jīng)常會問類似于“你的實(shí)驗(yàn)是染料法還是探針法”，“你用的探針是什么類型”等之類的問題，這其實(shí)是對熒光標(biāo)記的選擇。根據(jù)熒光標(biāo)記的不同，可以將熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)分為探針法和染料法兩大類。染料法染料法利用能與DNA雙鏈結(jié)合的染料來實(shí)現(xiàn)，如SYBR Green I。該染料在游離狀態(tài)下呈現(xiàn)微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA的雙螺旋小溝結(jié)合，其綠色熒光增強(qiáng)約1000倍。因此其總的熒光強(qiáng)度與雙鏈DNA含量成正比，利用這一關(guān)系可以反映生成的PCR產(chǎn)物的量（圖 1）。SYBR Green I的吸收約在497 nm，發(fā)射波長約在520 nm，與FAM熒光分子的光譜性質(zhì)類似，因此在所有的熒光定量PCR設(shè)備中都是通道檢測，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 圖1 染料法原理圖理論上，所有能與雙鏈DNA結(jié)合的染料都可以用于qPCR檢測，如溴化乙錠EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而選擇用于qPCR反應(yīng)的染料通常會從信號強(qiáng)度、生物安全性、檢測簡便性和經(jīng)濟(jì)適用性這幾個(gè)因素考慮。例如EtBr可能存在潛在的致癌性。綜合考慮下來，SYBR Green I成了比較理想的選擇。目前，使用Evagreen的實(shí)驗(yàn)者也越來越多，Evagreen作為一種新型的染料，其光譜性質(zhì)與SYBR Green I類似，其優(yōu)勢在于：? 對PCR反應(yīng)的抑制程度小。高濃度SYBR Green I會強(qiáng)烈抑制PCR反應(yīng)，因此要控制其使用濃度，一定程度上降低了DNA檢測的靈敏度。? 與DNA結(jié)合密度高。單位長度的DNA雙鏈上Evagreen的密度更高，為飽和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高檢測靈敏度的同時(shí)也可用于高分辨率溶解曲線HRM。? 化學(xué)性質(zhì)更穩(wěn)定，適合長期保存。TaqMan 探針TaqMan 探針基本可以滿足60%以上的qPCR實(shí)驗(yàn)，如常規(guī)的基因表達(dá)和拷貝數(shù)變異CNV實(shí)驗(yàn)。TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5'末端，而淬滅劑則在3'末端（圖2）。PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收; PCR擴(kuò)增時(shí), Tag酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。常用的熒光基團(tuán)是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 圖2 Taqman探針MGB探針對于要分辨單堿基差異的SNP實(shí)驗(yàn)，采用對堿基錯(cuò)配容忍度更低的MGB探針，在淬滅基團(tuán)后加入了DPI3基團(tuán)（圖3），從而提高了與靶標(biāo)結(jié)合的親和力；而且可以對靶點(diǎn)堿基進(jìn)行化學(xué)修飾，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 圖3 MGB探針雙雜交探針Taqman探針對探針的長度有比較嚴(yán)格的要求，雙雜交探針則消除了這一“缺陷”。雙雜交探針是由兩條寡核苷酸單鏈組成，一條的3’端帶有供體熒光分子，另一條的5’端帶有受體熒光分子（圖4）。游離狀態(tài)下熒光供體會發(fā)出熒光，但當(dāng)兩條單鏈都匹配到模板鏈上時(shí)，就會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET，受體熒光分子就可以發(fā)出熒光，其熒光強(qiáng)度與生成的產(chǎn)物的量成正比。雙雜交探針的優(yōu)勢有兩點(diǎn)：擺脫了探針長度的限制，較長的探針可以提高與模板匹配的成功率；只有上下游兩條探針都正確匹配后才能檢測到受體熒光分子發(fā)出的熒光，特異性有所提高。▲ 圖4 雙雜交探針分子信標(biāo)探針游離狀態(tài)下，分子信標(biāo)探針是一種莖環(huán)結(jié)構(gòu)，其環(huán)狀部分的15-30個(gè)堿基可以與靶標(biāo)區(qū)域相結(jié)合匹配，下端的配對區(qū)域（左右一般各5-6個(gè)堿基）則由重復(fù)的GC組成，從而將5’的熒光分子和3’的淬滅基團(tuán)緊緊聚在一起，熒光發(fā)生淬滅；當(dāng)退火時(shí)，分子信標(biāo)探針解開環(huán)并與模板靶標(biāo)雜交，這樣熒光分子和淬滅基團(tuán)的物理距離就變大了，熒光淬滅的前提就打破了（圖5）。除了MGB探針，分子信標(biāo)探針也非常適合用于SNP檢測。▲ 圖5 分子信標(biāo)探針除了上述幾種類型的探針之外，還有嘗試將引物和探針功能相結(jié)合的技術(shù)，如Amplifluor、LUX等，在設(shè)計(jì)難度上有所提高，但使用時(shí)更簡便。各有其應(yīng)用的側(cè)重點(diǎn)和設(shè)計(jì)上的利弊，在此不多贅述。那么在熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中，我們應(yīng)該如何進(jìn)行選擇呢？在這里，給大家總結(jié)了一些兩種方法的區(qū)別，供大家參考。表1 染料法和探針法的區(qū)別
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- 2021-12-20 13:35:08人28S抗核糖體抗體試劑盒
- 人28S抗核糖體抗體試劑盒,人(28SrRNP)ELISA檢測試劑盒本生生物公司供應(yīng)：ELISA試劑盒,分光光度計(jì)，血清，熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進(jìn)口凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)皿，培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過濾器。產(chǎn)品名稱：人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)ELISA試劑盒 貨號：BS-0605規(guī)格：96T/48T保存條件及有效期： 1、試劑盒保存：2-8℃。 2、有效期：6個(gè)月.人28S抗核糖體抗體試劑盒,人(28SrRNP)ELISA檢測試劑盒注：科研實(shí)驗(yàn)專用。
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