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2025-01-10 17:03:54免疫熒光共聚焦成像: 免疫熒光共聚焦成像是一種先進的顯微成像技術(shù)，它結(jié)合了免疫熒光標(biāo)記與激光共聚焦掃描技術(shù)。該技術(shù)利用特異性抗體對目標(biāo)分子進行熒光標(biāo)記，然后通過激光共聚焦顯微鏡的高分辨率成像能力，實現(xiàn)對細胞或組織內(nèi)目標(biāo)分子的精確定位和可視化分析。它能夠在三維空間上提供清晰的圖像，有助于研究細胞結(jié)構(gòu)、蛋白質(zhì)分布及相互作用等，是生物醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的工具，廣泛應(yīng)用于疾病診斷、藥物研發(fā)及細胞生物學(xué)等領(lǐng)域。

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免疫熒光共聚焦成像揭示新冠病毒(SARS-CoV-2)感染導(dǎo)致的結(jié)構(gòu)和功能損傷，尤其是運動纖毛損失

 徠卡顯微系統(tǒng)(上海)貿(mào)易有限公司 288
2022-11-06
免疫熒光共聚焦成像

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免疫熒光共聚焦成像問答

2023-08-21 11:41:24熱點應(yīng)用丨OLED的光致發(fā)光和電致發(fā)光共聚焦成像: 要點光致發(fā)光和電致發(fā)光是有機發(fā)光二極管（OLED）視覺顯示發(fā)展的重要技術(shù)。與共聚焦顯微鏡相結(jié)合，使用RMS1000共聚焦顯微拉曼光譜儀對OLED器件的光電特性進行成像研究。光譜和時間分辨成像獲得了比宏觀測試更詳細的器件組成和質(zhì)量信息。介紹近年來，有機發(fā)光二極管（OLED）已成為高端智能手機和電視全彩顯示面板的領(lǐng)先技術(shù)之一1。使用量的快速增長是因為OLED提供了比液晶顯示器（LCD）更卓越的性能。例如，它們更薄、更輕、更靈活、功耗更低、更明亮2。在典型的OLED器件中，電子和空穴被注入到傳輸層中，然后在中心摻雜發(fā)光層中復(fù)合。這種復(fù)合產(chǎn)生的能量通過共振轉(zhuǎn)移到摻雜分子中，從而使其發(fā)光。OLED發(fā)光的顏色取決于發(fā)光層中所摻雜分子的化學(xué)結(jié)構(gòu)。當(dāng)新的有機電致發(fā)光器件開發(fā)出來時，可以利用光致發(fā)光（PL）和電致發(fā)光（EL）光譜來表征單個元件和整個器件的光電特性。在本文中，RMS1000共聚焦顯微拉曼光譜儀用于表征四種成像模式下OLED器件的光電特性：PL、EL、時間分辨PL（TRPL）和時間分辨EL（TREL）。使用共聚焦顯微拉曼光譜儀來表征OLED的光譜和時間分辨特性獲得了比宏觀測試更詳細的信息。材料和方法測試樣品為磷光OLED器件，由圣安德魯斯大學(xué)有機半導(dǎo)體光電研究組提供。將樣品放置在冷熱臺（LINKAM）上，通過兩個鎢探針連接到器件電極上實現(xiàn)成像。使用RMS1000共聚焦顯微拉曼光譜儀進行PL、EL、時間分辨PL（TRPL）和時間分辨EL（TREL）成像，如圖1。圖1 PL、TRPL、EL和TREL成像的實驗裝置。將裝載樣品的冷熱臺放置在顯微鏡樣品臺上，如圖2所示。對于PL測試，使用532 nm CW激光器和背照式CCD探測器；對于TRPL測試，使用外部耦合的EPL-405皮秒脈沖激光器、MCS模式和快速響應(yīng)的PMT。對于EL測試，使用Keithley 2450 SMU向OLED器件加電壓，并用CCD探測器檢測；對于TREL測試，使用Tektronix 31102 AFG向OLED加一系列短脈沖電壓，使用MCS模式測試每個脈沖下的衰減。圖2 (a)安裝在RMS1000上的冷熱臺；(b) OLED器件電致發(fā)光寬場成像。測試結(jié)果與討論大面積光致發(fā)光和電致發(fā)光光譜成像OLED首次采用PL和EL光譜相結(jié)合的方法進行研究。當(dāng)使用共聚焦顯微拉曼光譜儀成像時，可以表征材料在整個器件中的分布以及在發(fā)光強度和顏色均勻性方面的整體質(zhì)量。圖3中的PL成像和相應(yīng)的光譜提供了器件上4個區(qū)域發(fā)光層分布的信息，還顯示了電極的位置。圖3 (a)OLED器件的PL光譜強度成像；(b)a中標(biāo)記的點1和點2的PL光譜。白色和灰色代表PL強度，顯示了有機發(fā)光層的位置。灰色區(qū)域為發(fā)光層被頂部電極覆蓋的位置。在頂部電極穿過發(fā)光層的地方，PL強度降低為未覆蓋區(qū)域強度的一半以下。這是由于頂部電極材料削弱了激光強度和光致發(fā)光強度。對于EL成像，鎢探針連接到與區(qū)域2相交的電極上。圖4中得到的EL圖像和相應(yīng)的光譜表明了EL發(fā)光僅發(fā)生在區(qū)域2中的發(fā)光層與電極重疊的區(qū)域。在PL成像中，空間分辨率主要取決于樣品上激光光斑的大小。而在EL成像中，由于沒有激光，因此是通過改變共焦針孔直徑來改變空間分辨率（將針孔直徑減小到25 μm）。圖4 (a)OLED器件的EL光譜強度成像；(b)a中標(biāo)記的點1和點2的EL光譜。EL強度在整個有源像素上不均勻，這對器件的質(zhì)量有影響。在區(qū)域外邊緣有兩個（白色）垂直條帶，強度比其余部分強。此外，存在許多EL強度降低的非發(fā)光區(qū)域。這表明器件有缺陷，理想情況下，OLED將在每個像素上呈現(xiàn)出密集和均勻的發(fā)光。高分辨率光致發(fā)光和電致發(fā)光光譜成像為了進一步研究，使用PL和EL對EL有源像素上的較小區(qū)域（圖5a和圖5b）進行高分辨成像。圖5b網(wǎng)格內(nèi)的上部區(qū)域是發(fā)光層與電極重疊的地方，下部區(qū)域是單獨的發(fā)光層。圖5c為 PL強度成像，再次表明被電極覆蓋的發(fā)光層PL強度小于未覆蓋的發(fā)光層。PL峰值波長圖像（圖5d）表明，有電極覆蓋的發(fā)光層與未覆蓋的發(fā)光層（611 nm）相比，PL發(fā)射峰發(fā)生紅移（620 nm）。峰值波長的變化表明在不同的區(qū)域中能級不同。圖5 (a) OLED器件電致發(fā)光寬場成像；(b)a網(wǎng)格內(nèi)的高分辨率寬場成像；(c)PL強度成像；(d)相同區(qū)域的PL峰值波長成像；(e)EL強度成像；(f)相同區(qū)域的EL峰值波長成像。EL成像顯示，與其余部分相比發(fā)射強度較弱的缺陷（圖5e）波長發(fā)生明顯紅移（圖5f）。這是由于缺陷處的EL能帶的信號強度降低以及在662 nm處EL能帶信號強度同時增加引起的。另外，在EL有源區(qū)域的最底部的區(qū)域中，發(fā)生藍移，這與在PL圖像上看到的波長變化一致。高分辨率時間分辨光致發(fā)光和電致發(fā)光成像為獲得額外信息，在同一區(qū)域進行TRPL和TREL成像，如圖6所示。分別用激光脈沖和電脈沖，在MCS模式下測試614 nm處OLED的PL和EL衰減。利用單指數(shù)模型擬合衰減曲線。在圖6a的TRPL成像中，EL活性區(qū)域（上部區(qū)域）中的PL壽命比EL非活性區(qū)域（下部區(qū)域）中的PL壽命短大約200 ns。如圖6c所示，分別為800 ns和600 ns。這里觀察到與圖4中PL強度和波長圖像的類似梯度，沿圖向下方向的發(fā)射強度增強，并且發(fā)生了藍移。因此，根據(jù)TRPL數(shù)據(jù)可得：當(dāng)光激發(fā)時，通過摻雜帶可獲得不同的能級。在圖6b中的TREL成像中，整個區(qū)域的壽命相似，大約為470 ns。發(fā)現(xiàn)EL壽命顯著短于相同區(qū)域的PL壽命。圖6 (a)OLED的時間分辨PL成像；(b)OLED的時間分辨EL成像；(c)a中選定區(qū)域的PL衰減曲線；(d)b中圖像的EL衰減曲線。結(jié)論RMS1000共聚焦顯微拉曼光譜儀用于測試OLED器件的PL、EL、TRPL和TREL成像。這些不同的成像模式提供了關(guān)于發(fā)光層和電極在整個器件中位置的詳細信息，在工作條件下器件的發(fā)光強度和顏色均勻性，以及關(guān)于PL和EL過程中帶隙能量的相對信息。參考文獻1. A. Salehi et al., Recent Advances in OLED Optical Design, Adv. Funct. Mater., 2019, 29, 1808803, DOI: 10.1002/adfm.201808803.2. J. M. Ha et al., Recent Advances in Organic Luminescent Materials with Narrowband Emission, NPG Asia Mater., 2021, 13, 1–36, DOI: 10.1038/s41427-021-00318-8.天美分析更多資訊

2023-08-21 11:50:20激光共聚焦熒光顯微鏡活體熒光物質(zhì)檢查: 激光共聚焦顯微鏡，簡稱CLSM（Confocal Laser Scanning Microscopy），是一種利用激光共振效應(yīng)進行成像的顯微鏡。它通過使用激光束掃描樣品的不同層面，將所得到的圖像合成成一幅清晰的三維圖像。與傳統(tǒng)顯微鏡相比，激光共聚焦顯微鏡具有更高的分辨率和更強的穿透能力，可以觀察到更加細微的結(jié)構(gòu)和更深層次的物質(zhì)。在活體熒光物質(zhì)的檢查中，激光共聚焦顯微鏡發(fā)揮了重要的作用。通過標(biāo)記活體細胞或組織的特定結(jié)構(gòu)或分子，激光共聚焦顯微鏡可以實時觀察到這些結(jié)構(gòu)或分子的活動和分布情況。在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，它可以用于觀察細胞的生長、分裂和死亡過程，研究細胞信號傳導(dǎo)和分子交互作用等。在藥物研發(fā)中，它可以用于觀察藥物在活體細胞或組織中的分布情況，評估藥物的療效和毒性。此外，在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域，激光共聚焦顯微鏡可以用于觀察神經(jīng)元的活動和連接，揭示大腦的工作機制。 NCF950激光共聚焦顯微鏡較寬場熒光顯微鏡的優(yōu)點：l 能夠通過熒光標(biāo)本連續(xù)生產(chǎn)薄（0.5至1.5微米）的光學(xué)切片，厚度范圍可達50微米或更大。（主要優(yōu)點）l 控制景深的能力。l能夠從樣品中分離和收集焦平面，從而消除熒光樣品通常看到的焦外“霧霾"，非共焦熒光顯微鏡下無法檢測到。（最重要的特點）l 從厚試樣收集連續(xù)光學(xué)切片的能力。l 通過三維物體收集一系列圖像，用于二維或三維重建。l收集雙重和三重標(biāo)簽，精確的共定位。l 用于對在不透明的圖案化基底上生長的熒光標(biāo)記細胞之間的相互作用進行成像。l 有能力補償自發(fā)熒光。耐可視共聚焦成像效果圖尼康共聚焦成成像效果圖NCF950激光共聚焦顯微鏡應(yīng)用，共聚焦顯微鏡在以下研究領(lǐng)域中應(yīng)用較為廣泛：1、細胞生物學(xué)：細胞結(jié)構(gòu)、細胞骨架、細胞膜結(jié)構(gòu)、流動性、受體、細胞器結(jié)構(gòu)和分布變化、細胞凋亡；2、生物化學(xué)：酶、核酸、FISH、受體分析3、藥理學(xué)：藥物對細胞的作用及其動力學(xué)；4、生理學(xué)：膜受體、離子通道、離子含量、分布、動態(tài)；5、遺傳學(xué)和組胚學(xué)：細胞生長、分化、成熟變化、細胞的三維結(jié)構(gòu)、染色體分析、基因表達、基因診斷；6、神經(jīng)生物學(xué)：神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)、神經(jīng)遞質(zhì)的成分、運輸和傳遞；7、微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)：細菌、寄生蟲形態(tài)結(jié)構(gòu)；8、病理學(xué)及病理學(xué)臨床應(yīng)用：活檢標(biāo)本的快速診斷、腫瘤診斷、自身免疫性疾病的診斷；9、生物學(xué)、免疫學(xué)、環(huán)境醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)。NCF950激光共聚焦顯微鏡配置NCF950激光共聚焦配置表激光器激光405 nm、488 nm、561 nm、640 nm探測器波長：400-750nm，探測器：3個獨立的熒光檢測通道；1個DIC透射光檢測通道掃描頭最大像素大小：4096 x 4096 掃描速度：2 fps（512 x 512像素，雙向），18 fps（512 x 32像素，雙向），圖像旋轉(zhuǎn): 360°掃描模式X-T, Y-T, X-Y, X-Y-Z, X-Y-Z-T針孔無級變速六邊形電動針孔；調(diào)節(jié)范圍：0-1.5毫米共焦視場φ18mm內(nèi)接正方形圖像位深12bits配套顯微鏡NIB950全電動倒置顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)NIS60無限遠光學(xué)系統(tǒng)（F200)目鏡(視野)10×(25)，EP17.5mm，視度可調(diào)-5～+5，接口Φ30觀察鏡筒鉸鏈?zhǔn)饺坑^察鏡筒，45度傾斜，瞳距47-78mm，目鏡接口Φ30，固定視度；1）目/攝切換：（100/0,50/50,0/100)；2）目視/關(guān)閉目視/可調(diào)焦勃氏鏡NIS60物鏡10×復(fù)消色差物鏡，NA=0.45 WD=4.0 蓋玻片=0.1720×復(fù)消色差物鏡，NA=0.75 WD=1.1 蓋玻片=0.1760×半復(fù)消色差物鏡，NA=1.40 WD=0.14 蓋玻片=0.17 油鏡100×復(fù)消色差物鏡，NA=1.45 WD=0.13 蓋玻片=0.17 油鏡物鏡轉(zhuǎn)換器電動六孔轉(zhuǎn)換器（擴展插槽），M25×0.75聚光鏡6孔位電動控制：NA0.55，WD26；相襯(10/20,40,60選配）DIC（10X，20X/40X）選配.空孔照明系統(tǒng)透射柯拉照明，10W LED照明；落射照明：寬場光纖照明6孔位電動熒光轉(zhuǎn)盤（B，G，U標(biāo)配）；電動熒光光閘；中間倍率切換手動1X，1.5X、共焦切換機身端口分光比：左側(cè):目視=100：0；右側(cè):目視=100：0；平臺電動控制：行程范圍130 mm x100 mm （臺面325 mm x 144 mm ）最大速度：25mm/s；分辨率：0.1μm - 重復(fù)精度：3μm。機械可調(diào)樣品夾板調(diào)焦系統(tǒng)同軸粗微動升降機構(gòu)，行程：焦點上7下2；粗調(diào)2mm/圈，微調(diào)0.002mm/圈；可手動和電動控制，電動控制時，最小步進0.01um；DIC插板10X，20X，40X插板；可放置于轉(zhuǎn)換器插槽；選配控制搖桿，控制盒，USB連接線軟件軟件：NOMIS Advanced C圖像顯示/圖像處理/分析2D/3D/4D圖像分析，經(jīng)時變化分析，三維圖像獲得及正交顯示，圖像拼接，多通道彩色共聚焦圖像

2022-12-07 11:47:14貼息貸款丨一體化全自動顯微共聚焦拉曼光譜儀 RM5: 英國愛丁堡儀器一體化全自動顯微共聚焦拉曼光譜儀 RM5儀器介紹RM5顯微共聚焦拉曼光譜儀是一款緊湊型的全自動顯微拉曼光譜儀，可以內(nèi)置多達三個激光器。具有可調(diào)節(jié)的電動狹縫和多位可調(diào)節(jié)的共聚焦針孔，用于獲取更高的圖像清晰度，更好的熒光背景抑制和更靈活的應(yīng)用條件優(yōu)化。適用于新型材料、生物醫(yī)藥、物質(zhì)鑒定等方面的測量，提供超高的光譜分辨率、空間分辨率和靈敏度，結(jié)合拉曼成像技術(shù)（2D/3D/Surface Mapping），實現(xiàn)全方位拉曼信息檢測。儀器特點+ 緊湊型一體化分析級拉曼光譜儀+ 多種配置一體化耦合+ 內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和自動校準(zhǔn)功能+ 真共聚焦技術(shù)+ 功能強大的Ramacle?軟件+ 高性能附件兼容（偏振組件、顯微鏡、樣品臺等）應(yīng)用范圍生物醫(yī)藥藥品成分和分布狀態(tài)分析；原料檢定；生物相容性；藥物/細胞相互作用；鋁箔上含有痕量撲熱息痛顆粒的拉曼成像圖植物細胞木質(zhì)素成像分布分析，A.白光圖；B.成像圖能源光伏以及半導(dǎo)體材料表征薄膜太陽能電池結(jié)構(gòu)分析；原位技術(shù)檢測充放電；電極材料的缺陷分析；材料本征應(yīng)力/應(yīng)變的特征；分散碳納米管在晶圓上分布的拉曼成像（左）+硅基石墨烯單晶拉曼成像（右）

2022-12-07 11:35:06貼息貸款丨科研級模塊化顯微共聚焦拉曼光譜儀RMS1000: 英國愛丁堡儀器科研級模塊化顯微共聚焦拉曼光譜儀RMS1000儀器介紹RMS1000拉曼光譜儀是一臺“開放式”研究級別的共焦顯微拉曼光譜儀。在儀器系統(tǒng)中可配置多達5個集成的窄帶激光器，另，可以連接外部激光器，以及用于熒光壽命測量的脈沖激光器。RMS1000是一個真正的共焦系統(tǒng)，具有可調(diào)節(jié)的電動狹縫和多個位置可調(diào)節(jié)的針孔，能實現(xiàn)更高的圖像清晰度，更好的熒光抑制，應(yīng)用優(yōu)化。適用于新型半導(dǎo)體材料、生物分子（如蛋白質(zhì)、多肽）等方面的研究，提供超高的光譜分辨率、空間分辨率和靈敏度。模塊化的設(shè)計，結(jié)合拉曼成像技術(shù)（2D/3D/Surface Mapping）和熒光成像技術(shù)(FLIM)，實現(xiàn)全方位樣品信息檢測。儀器特點+ 模塊化科研級拉曼光譜儀+ 雙焦長光譜儀可同時配置（800mm&250mm）+ 最多耦合4個檢測器（如CCD、EMCCD、InGaAs等）+ 最多耦合5個內(nèi)置激光器（配置外置激光器接口）+ 內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和自動校準(zhǔn)功能+ 功能強大的Ramacle?軟件+ 真共聚焦技術(shù)+ 強大的擴展功能（兼具拉曼+熒光測試）（正置/倒置顯微鏡）應(yīng)用范圍生物醫(yī)藥藥品成分和分布狀態(tài)分析；原料檢定；生物相容性以及DNA/RNA分析；藥物/細胞相互作用；微生物組織分析以及成像；藥片樣品的拉曼表面成像以及成分分析（撲熱息痛、阿司匹林、咖啡因）鈴蘭草根莖的雙光子成像（左圖）+熒光壽命成像（右圖）能源光伏薄膜太陽能電池結(jié)構(gòu)分析；原位技術(shù)檢測充放電；硅光電池的晶化率分析；電極材料的缺陷分析；光伏器件碳納米管空穴提取層（白光成像圖（左）+熒光光譜成像圖（右））新型材料材料本征應(yīng)力/應(yīng)變的特征；物相晶型鑒別及結(jié)晶度測量；環(huán)境傳感以及地質(zhì)學(xué)探究。不同材料樣品的成像（暗場成像、二次諧波成像、拉曼成像、PL成像）（從左到右）

2023-03-16 14:23:50基于共聚焦顯微技術(shù)的顯微鏡和熒光顯微鏡的區(qū)別: 熒光顯微鏡主要應(yīng)用在生物領(lǐng)域及醫(yī)學(xué)研究中，能得到細胞或組織內(nèi)部微細結(jié)構(gòu)的熒光圖像，在亞細胞水平上觀察諸如Ca2+ 、PH值，膜電位等生理信號及細胞形態(tài)的變化，是形態(tài)學(xué)，分子生物學(xué)，神經(jīng)科學(xué)，藥理學(xué)，遺傳學(xué)等領(lǐng)域中新一代強有力的研究工具。以共聚焦技術(shù)為原理的共聚焦顯微鏡，是用于對各種精密器件及材料表面進行微納米級測量的檢測儀器。材料科學(xué)的目標(biāo)是研究材料表面結(jié)構(gòu)對于其表面特性的影響。因此，高分辨率分析表面形貌對確定表面粗糙度、反光特性、摩擦學(xué)性能及表面質(zhì)量等相關(guān)參數(shù)具有重要意義。共焦技術(shù)能夠測量各種表面反射特性的材料并獲得有效的測量數(shù)據(jù)。VT6000共聚焦顯微鏡基于共聚焦顯微技術(shù)，結(jié)合精密Z向掃描模塊、3D 建模算法等，可以對器件表面進行非接觸式掃描并建立表面3D圖像，實現(xiàn)器件表面形貌3D測量。在材料生產(chǎn)檢測領(lǐng)域中能對各種產(chǎn)品、部件和材料表面的面形輪廓、表面缺陷、磨損情況、腐蝕情況、平面度、粗糙度、波紋度、孔隙間隙、臺階高度、彎曲變形情況、加工情況等表面形貌特征進行測量和分析。應(yīng)用1.MEMS微米和亞微米級部件的尺寸測量，各種工藝（顯影，刻蝕，金屬化，CVD， PVD，CMP等）后表面形貌觀察，缺陷分析。2.精密機械部件，電子器件微米和亞微米級部件的尺寸測量，各種表面處理工藝，焊接工藝后的表面形貌觀察，缺陷分析，顆粒分析。3.半導(dǎo)體/ LCD各種工藝（顯影，刻蝕，金屬化，CVD，PVD，CMP等）后表面形貌觀察，缺陷分析非接觸型的線寬，臺階深度等測量。4.摩擦學(xué)，腐蝕等表面工程磨痕的體積測量，粗糙度測量，表面形貌，腐蝕以及亞微米表面工程后的表面形貌。