Plasmid Agarose HP 親和層析介質(zhì)是一種新型高度交聯(lián)的親硫芳香族瓊脂糖層析介質(zhì)，用于純化超螺旋DNA，廣泛應(yīng)用于基因治療和DNA 疫苗的開(kāi)發(fā)應(yīng)用。該層析介質(zhì)具有高流速、低反壓、非特異性吸附低、良好的親水性、化學(xué)穩(wěn)定性和機(jī)械性特點(diǎn)，方便進(jìn)行規(guī)模放大，可縮短生產(chǎn)時(shí)間，提高生產(chǎn)效率。

產(chǎn)品性質(zhì)

運(yùn)輸和保存方法

1.常溫運(yùn)輸，避免日曬、雨淋、重壓。

2.密封保存在 4~30℃（保存溶液為 20%乙醇）干燥、通風(fēng)、清潔處，不可冷凍；用過(guò)的柱子保存在 4~8℃，20%乙醇溶液中。

3.有效期5年。

注意事項(xiàng)

1.柱的選擇：從理論上說(shuō)，只要柱足夠長(zhǎng)，就可以獲得理想的分辨率，但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān)，柱長(zhǎng)增加使流速減慢，峰變寬，分辨率降低；柱的直徑增加，使液體流動(dòng)的不均勻性增加，分辨率明顯下降。

2.純化過(guò)程樣品與層析介質(zhì)必須徹底平衡后，才能進(jìn)行柱層析。

3.所裝的柱床必須表面平整，無(wú)溝流及氣泡，否則應(yīng)重裝。

4.洗脫過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過(guò)快。

5.加樣及整個(gè)洗脫過(guò)程中，嚴(yán)防柱面變干。

6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

7.本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1 裝柱 

裝柱按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。必須保證每種材料都處于工作溫度，凝膠裝柱前需要脫氣。

2 平衡

使用2~5倍柱床體積的上樣平衡液平衡柱子，務(wù)必使流出液的電導(dǎo)和pH 同上樣緩沖液的 電導(dǎo)和pH完全一致。平衡液是含高濃度硫酸銨的Tris緩沖溶液，推薦緩沖液：2 M（NH₄）₂SO₄，10 mM EDTA，100 mM Tris-HCl，pH 7.5。

3 上樣

1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。

2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

4 洗脫

常用低濃度的硫酸銨溶液（1.7 M）加0.3 M氯化鈉溶液洗脫。

推薦洗脫液：100 mM Tris-HCl，1.7 M（NH₄）₂SO₄，10 mM EDTA, pH 7.5 + 0.3 M NaCl。 

5在位清洗

1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可用0.5~1倍柱床體積的2 M NaCl去除。

2）對(duì)于沉淀蛋白、疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，一般先用1 mol/L NaOH 洗脫5倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。

3）對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱床體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，需注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

6再生

一般可用 100 mM Tris, 10 mM EDTA 洗脫5倍以上柱體積，然后用結(jié)合蛋白時(shí)的平衡液洗到平衡即可。  

                                          HB220524