產品簡介

ECL化學發光超敏顯色試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體及其關聯的抗原。其原理是，蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸。洗膜后用本產品配制的ECL工作液，室溫孵育膜數分鐘，將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒。然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時，顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上。

本試劑盒采用了獨特的發光底物系統，ECL化學發光超敏顯色試劑盒是目前最靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑。

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產品特點

1.具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測低皮克級抗原；

2.發光迅速，亮度強，可在日光燈下觀察到印跡膜條帶；

3.持續發光時間長，熒光可使X光膠片感光達5小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；

4.可使用更高的抗體稀釋倍數(1∶2000～1∶10000)，大大節省抗體。

產品信息

儲存條件

2~8℃避光保存。有效期1年。

使用說明

1. 執行常規電泳、轉膜、HRP標記抗體或者HRP標記核酸探針孵育、洗膜。

【注】：ECL發光液是HRP的顯色底物，因此檢測系統最終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。

2. 最后一次洗膜的同時，新鮮配制發光工作液：分別取等體積的A液和B液，混勻后，室溫放置備用。

【注】：建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

3. 用平頭鑷取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液，勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發光工作液（125μL發光工作液/cm²膜）中，與發光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準備立即壓片曝光。

【注】：孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應，使用過少的發光工作液不利反應進行，也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小，但勿降低發光液使用比例。

4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。

5. 在X光膠片暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將印跡膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹印跡膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋印跡膜的保鮮膜固定在暗盒內，蛋白帶面向上。

6. 暗房內壓X光膠片，分別曝光不同的時間，如數秒到數分鐘。顯影沖洗。

注意事項

1.步驟1~5可在日光燈下操作；但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

2.長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。

3.發光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X光膠片感光，因此弱帶可曝光1~10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發光和曝光。

4.由于超敏發光液極其靈敏，強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1∶1000~1∶4000，二抗1∶2000~1∶5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導致失敗。

5.某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應選擇高質量保鮮膜。

6.使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

7.疊氮化鈉（NaN₃）能抑制HRP活性，若回收HRP標記探針或者抗體應避免使用NaN₃，如必需使用勿超過0.01%。

8.本品無特殊毒性，按普通化學品處理。

9.本產品僅作科研用途！

10.為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

Ver.CN20230726