產品描述

CFDA, SE，英文全稱Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內的分裂增殖過程。 

CFDA, SE是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具細胞膜滲透性，本身不具有熒光發光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester，CFSE），可發強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE還可自發性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養基內，被后續清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數月，因此非常適用于細胞群落分析。

CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SE最常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。

CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，Ex=494 nm，Em=521 nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。本品以粉末形式提供，需用DMSO制備儲存液后再使用。

產品性質

運輸與保存

室溫運輸。-20℃干燥避光保存，有效期2年。避免反復凍融。

注意事項

1）不同的細胞其細胞內酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

2）熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

3）為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。

操作方法

1. CFSE儲存液（5 mM）的配制

用1 mL DMSO溶解2.79 mg CFSE，充分混勻即得到5 mM的儲存液（1 mg/ml的CFSE溶液濃度相當于其摩爾濃度1.8 mM）。

【注意】該儲存液需立即使用，根據使用量計算如有剩余請務必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融。

2. CFSE工作液（0.5-5µM）的配制

使用前用含20 mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0）對上述CFSE 儲存液進行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

3. 操作方法

【注意】：以下是針對活細胞染色的推薦步驟，可根據實際情況進行細胞藥物處理，適當調整實驗步驟。

1）離心收集細胞，調整細胞濃度為1-5×10⁵個/管；

2）用500 µL CFSE工作液懸浮細胞，于室溫或37℃避光孵育10-30 min；

3）吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細胞，用500 µL預熱HHBS或培養液懸浮細胞；

4）在Ex/Em=490/520 nm下用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細胞。

HB220915