產品描述

Hifair^® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair^® Ⅱ Reverse Transcriptase而開發的即用型預混液。該酶的熱穩定性大幅度提高，可耐受高達50℃的反應溫度，適合具有復雜二級結構的RNA模板的逆轉錄。同時，該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。

該預混液包含gDNA digester和2×Hifair^® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中殘留的基因組DNA污染，保證后續結果更加可靠。2×Hifair^® Ⅱ SuperMix plus含有逆轉錄反應所需的所有組分（Buffer，dNTP，Hifair^® Ⅱ Reverse Transcriptase，RNase inhibitor，Random primers/ Oligo (dT)₁₈ primer mix），只需加入RNA模板和 RNase-free ddH₂O即可進行逆轉錄反應，并同時終止gDNA digester的作用，保證cDNA的完整性。

該產品適用于兩步法RT-qPCR檢測，針對qPCR進行Random primers/ Oligo (dT)₁₈ primer的比例優化，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個區域起始，并具有相同的逆轉錄效率，最大程度保證了qPCR結果的真實性和可重復性。逆轉錄產物兼容SYBR^® Green和探針法qPCR，可以根據實驗目的，選擇UNICON^® qPCR SYBR^® Green Master Mix，Hieff^® qPCR SYBR^® Green Master Mix或Hieff^® qPCR TaqMan Probe Master Mix等試劑配合使用，進行高性能的基因表達分析。

產品組分

【注】：2×Hifair^® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制劑。

運輸和保存方法

干冰運輸。-20℃保存。有效期18個月。

注意事項

1）gDNA digester和2×Hifair^® Ⅱ SuperMix plus含有高濃度的甘油，使用前請短暫離心，吹打混勻。

2）建議RNA是溶于水而不是TE Buffer中，因為TE Buffe會干擾gDNA去除以及逆轉錄反應。

3）可以不經過基因組去除步驟，直接進行逆轉錄，這樣所得到的結果與使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat No. 11120ES) 效果一致。但是請勿將gDNA digester與11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用，因其不含終止gDNA digester反應的成分，會影響反轉錄和后續的qPCR實驗。

4）反應液的配制應在冰上操作完成，操作過程應避免RNase污染。

5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

6) 本產品僅作科研用途！

第一鏈cDNA合成操作步驟

1. 殘留基因組DNA去除

在RNase free離心管中配制如下混合液，用移液器輕輕吹打混勻。42℃ 孵育2 min。

【注】：* 20 μL逆轉錄反應體系建議Total RNA的投入量不超過1 μg。如果目的基因的表達豐度低，最多投入5 μg Total RNA，否則RNA投入量過高，可能會超過后續定量PCR的線性范圍。

2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）

在第1步的反應管中直接加入2×Hifair^TM Ⅱ SuperMix plus，用移液器輕輕吹打混勻。

3. 逆轉錄程序設置

標準程序（適用于微量和常規量的模板量）

【注】：逆轉錄溫度：推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復雜模板，可將逆轉錄溫度提高到50℃。

4. 逆轉錄產物可立即用于qPCR反應，也可-20℃短期保存，若需長期保存，建議分裝后，于-80℃保存，避免反復凍融。

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