產(chǎn)品簡介

ATP是細(xì)胞內(nèi)最重要的能量分子，可以用來衡量細(xì)胞新陳代謝水平，并與活細(xì)胞數(shù)目具有良好的線性關(guān)系，因此，可通過ATP含量反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)目。ATP生物發(fā)光技術(shù)的原理是熒光素酶以熒光素、三磷酸腺苷(ATP)和O₂為底物，在Mg²⁺存在時，能將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。ATP既是熒光素酶催化發(fā)光的必需底物，又是所有生物生命活動的能量來源。在熒光素酶催化的發(fā)光反應(yīng)中，ATP在一定的濃度范圍內(nèi)，其濃度與發(fā)光強(qiáng)度呈線性關(guān)系。

本試劑盒采用生物發(fā)光(bioluminescent)法，利用Firefly luciferase(螢火蟲熒光素酶)催化底物——熒光素的轉(zhuǎn)化，高效利用ATP的能量，發(fā)射出光子。發(fā)光信號與存在的ATP量呈正比，而ATP與存在于培養(yǎng)基中的細(xì)胞數(shù)目直接呈正比。

本試劑盒提供的發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑線性范圍寬、靈敏度高、穩(wěn)定性好。96孔板中，在100個至100,000個細(xì)胞范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，但不同細(xì)胞的檢測數(shù)量上限會有不同。此外，操作簡單，試劑盒中提供的檢測試劑為即用型，讀數(shù)穩(wěn)定，檢測速度快，完成檢測僅需約10 min，無需洗滌細(xì)胞，也無需更換或去除培養(yǎng)液。相比于其他常見的細(xì)胞活力測定方法，如Calcein-AM、CCK-8等，ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測更加簡便快捷。

圖1 ATP Luminescent 超靈敏細(xì)胞活力檢測試劑盒檢測原理

產(chǎn)品信息

組分信息

儲存條件

-25~-15℃儲存，有效期1年。

使用說明

1.細(xì)胞培養(yǎng)

使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測的96孔板，每孔接種100 μL細(xì)胞（根據(jù)培養(yǎng)時間確定初始接種的細(xì)胞密度，檢測時每孔細(xì)胞數(shù)量不宜超15萬個），同時設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液的孔作為陰性對照。37 ℃，5 % CO₂培養(yǎng)細(xì)胞。也可以設(shè)置細(xì)胞的濃度梯度，以得到最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)需要在合適的時間加藥處理細(xì)胞。

2.（可選）ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

把自備的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用 PBS稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻龋?6孔板每孔加入100 μL的標(biāo)準(zhǔn)品。

3. 細(xì)胞活力檢測

1）融解凍存的發(fā)光法檢測試劑，并平衡至室溫；

2）取出細(xì)胞培養(yǎng)板，室溫平衡10 min；

3）96孔板每孔加入100 μL檢測試劑（384 孔板每孔25 μL）（由于孔的邊緣效應(yīng)，可能會導(dǎo)致發(fā)光信號不穩(wěn)定，不建議在邊緣鋪板）；

4）室溫振蕩2 min，以促進(jìn)細(xì)胞的裂；

5）室溫放置10 min，使發(fā)光信號趨于穩(wěn)定；

6）使用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測，檢測波長560 nm。根據(jù)儀器要求設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)，每孔的檢測時間一般為0.25-1 s，具體需根據(jù)儀器的檢測靈敏度進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整；

7）根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)計算細(xì)胞的相對活力，或根據(jù)ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線計算ATP含量從而得出細(xì)胞的相對活力。

【注】：檢測效果因細(xì)胞的種類不同而異，對于一些ATP含量特別高的細(xì)胞，在細(xì)胞數(shù)量達(dá)到100,000以上可能會出現(xiàn)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)繼續(xù)升高，但喪失線性關(guān)系。

注意事項(xiàng)

1. 熒光素酶的活性對溫度比較敏感，所以反應(yīng)前細(xì)胞和檢測試劑均需平衡至室溫后再進(jìn)行測定。請勿室溫存放。

2. 檢測試劑請混勻后使用。

3. 本試劑盒的檢測試劑中含有熒光素酶，反復(fù)凍融會導(dǎo)致其逐漸失活。為取得良好的使用效果，第一次解凍后可適當(dāng)分裝保存，但需注意分裝的容器不能有ATP污染。

4. 待測藥物的溶劑含量較高時可能會干擾熒光素酶反應(yīng)，從而影響化學(xué)發(fā)光信號。可以通 過設(shè)置含有溶劑的細(xì)胞培養(yǎng)液對照孔排除溶劑的干擾。

5. 檢測時須使用適合于細(xì)胞培養(yǎng)的白色或黑色的96孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相鄰孔之間會產(chǎn)生相互干擾。

6. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Ver.CN20230412