隨著生物質譜技術的快速發展，蛋白質和多肽分析的分辨率、靈敏度、準確性、鑒定能力大為提高。尤其是Top-down蛋白質鑒定方法大量使用后，傳統的一維、二維電泳或液相色譜等樣品制備技術已經不能滿足需要。分析前如何降低樣品的復雜程度、獲得完整蛋白質、富集低豐度蛋白質、降低高豐度蛋白質對低豐度蛋白質的干擾、保留蛋白質的各種翻譯后修飾狀態、提高樣品處理通量等，已成為蛋白質樣品制備方法的重要前提。

英國Expedeon公司推出了一套新型的微量蛋白質制備系統(多通道凝膠洗脫液相組分截留電泳) Gelfree 8100Fractionation System。該系統使用凝膠洗脫液相組分截留電泳技術（gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis，GELFREE），基于蛋白質分子量的不同，對完整蛋白質進行分組，使用移液器在液相中回收蛋白質。該系統能在短時間內同時處理8個樣品。在3.5kDa500kDa范圍內，相對于其它傳統分組方法，具有上樣量大、重現性好、分辨率高、回收率高、分離速度快和操作簡單的優點。能增大蛋白質組分析的覆蓋范圍，改善后期質譜分析的結果，提高蛋白質鑒定結果的可信度。

特點及應用

• 基于分子量的不同對完整蛋白質進行分離純化，收集；

• 蛋白質樣品在液相中回收，避免了傳統一維、二維電泳后的染色和條帶或點位切割步驟；

• 蛋白質分離范圍高達3.5kDa500kDa；

• 8個分組通道，滿足高通量樣品處理的要求，每個通道最多可將樣品分為30個組分；

• 用戶可根據需要自行設置蛋白質分組程序，分離純化特定的目標蛋白；

• 樣品容量大，每個通道蛋白質上樣量最高可達1mg，是普通一維電泳的5倍以上，有利于富集低豐度蛋白質；

• 回收率高，>80%；

• 重現性好，CV<15%；

• 分離過程不受蛋白質疏水性或等電點的影響,這就意味著你幾乎覆蓋整個蛋白質組。

• 簡化蛋白質組成的復雜程度，縮小復雜蛋白質樣品的動態范圍，便于使用LC-MS/MS進行Bottom-Up蛋白質組學研究；

• 蛋白質回收后保留其完整性，便于進行Top-Down蛋白質組學研究，分析翻譯后修飾、蛋白質異構體、氨基酸衍生物等；

• 蛋白質回收后在溶液內消化，免去了費時的膠內消化步驟；

• 特別適合為LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印跡等分析方法制備樣品；

Gelfree 8100微量蛋白質制備電泳由主機和8通道電泳槽兩部分構成。主機設計緊湊，能為8個獨立的電泳通道提供電壓,設置暫停用于收集組分。使用觸摸屏，可以設置電壓、組分系列和使用的通道數等參數，進行寬范圍的組分分析或目標蛋白的富集。運行過程中，觸摸屏實時顯示每個通道電泳狀態及電壓電流值。

電泳槽由五個部分組成，分別是：陰極緩沖液槽、上樣槽、電泳凝膠管、樣品收集槽、陽極緩沖液槽。電泳凝膠管是內裝預制SDS-PAGE膠的玻璃管。緩沖液槽與上樣槽及收集槽之間由一個截留分子量為3.5kDa的膜分隔開。

電泳槽套盒：

一次性電泳槽套盒含8個獨立通道，可同時或分別使用18個通道，處理18個樣品，未使用的通道可保存供以后使用。針對不同的需求，提供四種電泳槽套盒供選擇。

Gelfree 8100微量蛋白質制備電泳的工作原理：

樣品和樣品緩沖液混合后加入到上樣槽內

電泳開始后，蛋白質首先在濃縮膠內濃縮

在分離膠內，較小的蛋白質移動更快，更先從膠內進入收集槽,

到達預設的收集時間時，電泳暫停，從收集槽中收集第一組分的蛋白質

使用Gelfree 8100（膠濃度為10%）將200微克釀酒酵母菌總蛋白分離成12個組分，

然后使用一維蛋白質電泳觀察分組結果

對于不同的蛋白質上樣量，優化好收集間隔時間，可以zui*程度的提高蛋白質的回收效率

Gelfree 8100微量蛋白質制備電泳和質譜結合時，制備蛋白質樣品的操作流程