CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium（Serum-free）培養基是無血清培養基，無血清無蛋白，不含任何動物源成分。適應于昆蟲細胞（Sf 9、High Five等）懸浮馴化及規模化無血清懸浮培養，支持昆蟲細胞快速高密度擴增及高效表達蛋白產品。 可用于新冠疫苗、VLP 等產品研發和生產過程，支持從研發至規模化生產。

 

運輸與保存方法

冰袋運輸。2～8℃，避光保存，有效期1年。

 

使用方法

一、標準參數

參數	設定值
50mL TPP 管	培養體積： 10-20 mL
125~1000mL 搖瓶	培養體積： 搖瓶總體積的 20~30%
搖床轉速	TPP：轉速 220Rpm,  搖瓶 110-130 Rpm
搖床振幅	50mm
培養基	CelCulSFTM Insect Cell Culture Medium（Serum-free）
接種密度	1.0×106 cells/mL
培養溫度	27℃
CO2%	Atmosphere
相對濕度	80%

二、培養基的適應

通常，在原用培養基中生長的昆蟲細胞可直接離心換液為本培養基。特殊情況下，可嘗試轉移到由50%原用培養基和50% CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium組成的新培養基中進行適應性生長。

1. 細胞傳代當天，取0.5mL細胞懸液，用細胞計數儀分析活細胞密度（×10⁶細胞/mL）和細胞活率（%）。將原用培養基中生長的細胞移入新培養基*（50% CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium + 50%原用培養基），接種密度為1.0×10⁶/mL，傳代后按照規定的環境條件培養細胞。

2. 細胞培養至48±3小時后，重復1.2.1步驟，建議按此方法進行至少3次細胞適應性傳代。當細胞活率高于90%時轉入100% CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium培養基培養。

三、 細胞傳代和擴增

1. 27℃水浴中預熱CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium 培養基。

2. 使用75%酒精清潔/消毒生物安全柜。

3. 使用75%酒精噴灑培養基瓶，并置于生物安全柜。

4. 從培養箱中取出搖瓶（或TPP管），噴灑75%酒精并置于生物安全柜。

5. 接種密度為1.0×10⁶ viable cells/mL。培養48±3小時后，取0.5mL細胞懸液，用細胞計數儀分析活細胞密度（×10⁶細胞/mL）和活細胞（%）。

6. 傳代前，如果Sf9細胞密度低于2.5E6 cells/mL（High five細胞密度低于4.0E6 cells/mL），或細胞活率低于90%，需要170g - 190g（大約800 rpm-1000 rpm）離心5分鐘處理細胞。輕輕棄上清，使用100%新鮮培養基按1.0 ×10⁶/mL重懸細胞，并將細胞接種至新搖瓶（或TPP管），傳代后按照規定的環境條件培養細胞（見第1.1節）。

7. 如果傳代前Sf9細胞密度高于2.5E6 cells/mL（High five細胞密度高于4.0E6 cells/mL）且活細胞率高于90%，則將適量細胞懸液轉移到新搖瓶（或TPP管）中，并用新鮮培養基直接調整最終培養體積進行細胞傳代，然后在規定的環境條件下培養細胞（見第1.1節）。

如果傳代比（傳代后的種子密度：傳代前的細胞密度）大于1:2.5（Sf9）或大于1:4（High five），細胞需要離心并重新懸浮在100%新鮮培養基中。

四、細胞凍存

1. 細胞冷凍前，將含新鮮異丙醇的程序降溫盒、凍存管等所需材料置于4℃冰箱中，預冷至少24小時后冷凍保存，或在-20℃下放置2小時~4小時后冷凍保存。

2. 根據凍存細胞的數量、凍存體積和凍存密度（建議凍存密度為25-35×10⁶ /mL/支），計算所需的細胞量，并移入離心管中，以800rpm-1000rpm（即170g-190g）離心5min。

3. 去除剩余上清液，拍打離心管底部使細胞均勻分散，加入細胞冷凍液，輕輕吹打細胞，形成均勻的細胞懸液。

4 用一次性無菌移液管將1mL細胞凍懸液移入預冷凍存管中，置于冰上保存；

5. 離心管中的細胞懸液在分裝過程中需要反復混合。分裝完成后，將凍存管轉移至預冷的程序降溫盒中，在-80℃冰箱中至少保存24小時；

6. 轉移至液氮罐中繼續保存。

五、 細胞復蘇

1. Day 0時復蘇細胞

2. 使用75%酒精清潔/消毒生物安全柜。

3. 27℃水浴中預熱CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium培養基；

4. 使用75%酒精噴灑培養基瓶，并置于生物安全柜；

5. 從液氮罐中取出凍存管，并置于干冰上；

6. 復蘇1支細胞，并在37℃水浴中，輕輕晃動凍存管，解凍約1-2分鐘；

7. 用75%酒精噴灑凍存管外壁；

8. 用無菌移液管將凍存管中的細胞輕輕移到含有10mL預熱培養基（CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium）的離心管中。如有必要，使用預熱的培養基（CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium）沖洗凍存管中的細胞；

9. 170g-190g（約800rpm-1000rpm）離心5分鐘，丟棄上清液并將細胞重懸于10mL新鮮預熱培養基（CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium）中。

10. 取0.5mL細胞懸液，用細胞計數儀分析活細胞密度（×10⁶/mL）和細胞活率（%）。

11. 然后使用預熱培養基（CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium）將細胞密度調節至1.0×10⁶cells/mL，轉移至搖瓶（或TPP）中并將細胞置于規定的環境條件下培養細胞（見第1.1節）。

12. 48±3 小時后，傳代、擴大培養細胞。

注：如果細胞活率＜85%，需要170g-190g（大約800rpm~1000rpm）離心5分鐘處理細胞。棄上清，使用100%新鮮培養基按1.0 ×10⁶/mL重懸細胞，置于規定的環境條件下培養細胞。

六、懸浮昆蟲細胞表達蛋白

1. 細胞在CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium 中培養，穩定傳代3代后可進行病毒感染；

2. 按1.0×10⁶cells/mL接種，72±3 小時后，取 0.5mL 細胞懸液，用細胞計數儀分析活細胞密度（×10⁶/mL）和細胞活率（%）；

3. 用相同體積的預熱 CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium 培養基稀釋培養物（培養物體積：待添加的CelCulSF^TM Insect Cell Culture Medium 培養基體積=1:1）；

4. 根據病毒培養工藝，接種病毒，并繼續培養病毒至收獲。

 

注意事項

1.細胞應及時傳代。如果細胞密度很高，會導致細胞狀態下降，死亡細胞增多，細胞碎片增多，細胞聚集；

2.液體細胞培養基不宜長時間光照或熱照，應避光保存在2～8℃。

HB230113