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PNGase F(N-糖酰胺酶F或肽N-糖苷酶 F)

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詳細介紹

產品描述

 

N-糖苷酶 F (PNGase F)是一種酰胺水解酶,經過和平空間站伊麗莎菌克隆主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。并在 E. coli大腸桿菌中重組表達,可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖、雜合和復雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點為糖蛋白內側N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵,同時將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉化為天冬氨酸。本產品hissumo標簽,常應用于抗體及其相關蛋白完全去糖基化。

 

產品性質

 

中文別名Chinese synonym

N-糖酰胺酶FN-糖苷酶 F

英文別名(English synonym

PNGase F

來源(Source

大腸桿菌表達

分子量(Molecular weight

48.4 kDa

比活性(Specific activity

50000 U/mL

緩沖液組分(Buffer

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol

酶活定義(Unit Definition

1個酶活力單位指在10 μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10 μg變性RNase B中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。

 

產品組分

 

編號

組分名稱

組分成分

產品貨號/規格

20411ES01

20411ES02

20411-A

PNGase F

PNGase F

15000 U

75000 U

20411-B1

Buffer 110×

5% SDS; 400 mM DTT

150 μL

750 μL

20411-B2

Buffer 210×

200 mM Tris, PH 7.5

300 μL

1500 μL

20411-B3

10% NP-40

10% NP-40 in MilliQ-H2O

300 μL

1500 μL

 

運輸和保存方法

 

干冰運輸-20保存有效期12個月

 

使用方法

 

1、變性條件下蛋白質去糖基化:

1)在水中加入1 μL Buffer 1目標糖蛋白(1-20 μg),至終體積10 μL

2100℃溫度下煮沸10 min使其變性,冰上冷卻離心10

3)加入2 μLBuffer 22 μL10NP-406 μL去離子水,總反應體積20μL

4)加入2 μLPNGase輕輕混勻。37℃孵育1-3 h

 

2、非變性條件下蛋白質去糖基化:

1)在水中加入2 μLBuffer 2目標糖蛋白(1-20 μg至最終體積為 20 μL

2)加入 2~5 μL  PNGase F, 輕輕混勻。

337°C 孵育 4-24 h

注意:在變性條件下大多數底物能夠更好的去糖基化,在非變性條件下可能需要增加PNGase F量和延長孵育時間。

 

注意事項

 

1為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2本產品僅作科研用途!

HB221031

 

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