一、布魯氏菌病抗體檢測試劑盒

通用名：布魯氏菌病抗體試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Brucella（ELISA）

二、包裝規格  96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

三、預期用途  布魯氏菌病是由布魯氏菌（Brucella）引起的人、畜共患傳染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流產、不育和各種組織的局部病灶。

布魯氏菌病抗體試劑盒用于檢測牛、羊血清中布魯氏桿菌抗體，可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。

四、試劑盒原理

布魯氏菌病抗體檢測試劑盒由預包被布魯氏菌抗原的酶標板、酶標記物、抗體工作液及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本及酶標記物、抗體工作液，經溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體，則將與抗體工作液競爭結合酶標板上抗原，酶標記物與抗體工作液及酶標板上抗原形成復合結合物；再經洗滌除去未結合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有布魯氏菌抗體則將阻斷酶標記物、抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。

五、試劑盒組成

酶標板、酶標記物、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

3.用工作洗滌液將待檢牛血清先按10倍稀釋（如10μl血清加入90μl工作洗滌液中，混勻），待檢羊血清按25倍稀釋（如4μl血清加入96μl工作洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入稀釋后的血清樣品50μl。

然后每孔依次加入50μl酶標記物、50ul抗體工作液。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應45分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干。

6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。

7.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。