一、牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測(cè)試劑盒

通用名：牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Test Kit for Antibodies to Bovine and sheep Foot and Mouth Disease Virus A/O （ELISA）

二、包裝規(guī)格  96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

三、預(yù)期用途  口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，其特征為口腔黏膜、蹄部、乳房皮膚發(fā)生水泡和爛斑。

用于檢測(cè)牛羊血清中口蹄疫病毒A/O型抗體，可用于口蹄疫病毒A/O型疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。

四、原理

  牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體檢測(cè)試劑盒由預(yù)包被口蹄疫病毒A/O型抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)牛羊血清樣本中口蹄疫病毒A/O型抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入待檢樣本和抗體工作液，經(jīng)溫育后洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有口蹄疫病毒A/O型抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色；反之則出現(xiàn)顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值， 即可知樣品是否含有口蹄疫病毒A/O型抗體。

五、牛羊口蹄疫病毒A/O型抗體試劑盒組成

酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照

六、儲(chǔ)存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月。

包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為12個(gè)月。

【樣品準(zhǔn)備】

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長(zhǎng)期需置-20℃保存。

2.待檢血清樣本恢復(fù)室溫、混勻待用。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗(yàn)方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl；樣品孔每孔先加入45μl工作洗滌液,再加入5μl血清樣本。

4.每孔加抗體工作液50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，一次拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應(yīng)15分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。

【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對(duì)照吸光值≥0.8，陽(yáng)性對(duì)照吸光值≤陰性對(duì)照吸光值×50%。