多種研究手段在刻畫生物組織構成中發揮作用，但也都存在一定程度的局限性，比如高通量測序技術包括新興的空間轉錄組能夠揭示細 胞的基因組和轉錄組差異，卻無法可視化細胞間的形態特征；流式細胞術能夠篩選分析多種細胞型組分，卻無法得知細胞的形態與空間 位置信息；傳統免疫組化能夠直觀標記某個蛋白的分布與表達，然而標記數量有限；通過連續切片技術雖然可實現多標，但是存在一定 的誤差，非意義上的單細胞多標。 多重免疫熒光技術在生物組織分析中具有獨特優勢，能夠突破常規免疫熒光抗體種屬限制，可實現在一張切片實現多個靶標（≥9色） 的標記，并能對細胞的表型、細胞間的原位空間信息、生物組織的生態群進行定量分析，更為有研究價值。2019年《JAMA Oncol》 發表的一項研究顯示，多重熒光免疫組化技術比目前廣泛使用的技術PD-L1 IHC、基于下一代測序的腫瘤突變負荷(TMB)和基因表達譜 (GEP)具有更高的預測價值。