培養方法

MDBK (NBL-1) 牛腎細胞

貼壁，上皮細胞樣

編號： 338525

產品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶 ；

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作

培養：37℃，5%CO₂ CM2-1 培養液

收貨須知：收貨當天發現異常，請在 24 小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若 長時間不使用，應過夜轉移至液氮保藏；T25 形式，收貨后先培養瓶原裝置于培養箱靜養 4h，然后再對細胞進行常規操作。復蘇時每 管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發服務。

培養條件：37℃，5%CO₂，CM2-1 培養液。CM2-1 培養液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640 培養基，含谷氨酰胺。

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入 安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養箱中，過夜換液，3-5 天長滿。

傳代/凍存：將舊培養液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在顯微鏡下觀察， 期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落時，吸除大部分胰酶，留約 0.5mL，移至培養箱消化，約 3min 取出。

①傳代：用 6mL CM2-1 培養液終 止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分 3~6 皿培養；

②凍存：用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為 3 支凍存管， 用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質量記錄：根據復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結果如下：

項目	質量標準	復蘇記錄
復活性	18h 貼壁，120h 長滿 80%	過夜 18h 觀察貼壁，110h 密度達 80%
細胞形態	貼壁，上皮細胞樣	CM2-1 培養液中，貼壁，上皮細胞樣，梭形、多角形
附圖
結論	復活性好，且細胞形態無異常，合格

質檢員/日期： 朱玥 2020.05.21            審核員簽字：李璐