培養方法

hCMEC/D3 永生化人腦微血管內皮細胞

貼壁，上皮細胞樣

編號： 337728

培養：37℃，5%CO₂ ECM 培養液

產品形式： 2mL 凍存管 × 2 支、或 T25 × 1 瓶

安全等級： 一級，安全柜或超凈臺操作

收貨須知：收貨當天發現異常，請在 24 小時內及時聯系客服，逾期視為收貨良好；凍存管形式，收貨后及時置于-80℃冰箱保存，若長時間不使用，應過夜轉移至液氮保藏；T25 形式，收貨后先培養瓶原裝置于培養箱靜養 4h，然后再對細胞進行常規操作。復蘇時每管一次用完不得留存，復蘇后傳一代，即可正常使用。請嚴格按照本說明操作，否則造成細胞失活等情形，不予提供補發服務。

培養條件：37℃，5%CO₂，ECM 內皮細胞專用培養基。ECM 培養液：500mlECM+25mlFBS+5mlECGS+5mlP/S

復蘇步驟：

①新制 100mm 平皿 1 個，含 12mL 上述培養液；

②凍存管從液氮或-80℃中取出，37℃水浴 1~2min,待完全溶解后盡快移入 安全柜復蘇；

③用無菌吸管吸取溶解液打入新制平皿中，順時針搖勻；

④放入（37℃，5%CO₂）培養箱中，過夜換液，5-7 天長滿。

傳代/凍存：將舊培養液吸除，PBS 清洗兩遍后，加入 2mL（/100mm 皿/T25 瓶）胰酶（0.25%Trypsin+0.02%EDTA），在顯微鏡下觀察， 期間禁止搖晃培養皿，細胞剛有脫落時，吸除大部分胰酶，留約 0.5mL，移至培養箱消化，約 0.5min 取出。傳代用 6mL 10%的 FBS 完 全培養液終止消化，輕輕吹打均勻細胞，后可分 3~6 皿培養；凍存則用 3mL 凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為 3 支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存。

復蘇質量記錄：根據復蘇要求，對以上細胞株進行復蘇，記錄結果如下：

項目	質量標準	復蘇記錄
復活性	18h 貼壁，168h 長滿 80%	過夜 18h 后觀察貼壁，108h 密度達 80%
細胞形態	貼壁，上皮細胞樣	ECM 培養液中，貼壁，上皮細胞樣，多角形、梭形
附圖
結論：	復活性好，且細胞形態無異常，合格

質檢員/日期： 丁保敏 2020.07.14            審核員簽字：朱玥

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