流式細胞儀基本原理
流式細胞儀集電子、計算機、激光、流體理論于一體，其是進行流式細胞分析的儀器。在功能水平上定量分析和分選單細胞或其他生物粒子的一種檢測手段，即是流式細胞術。其能夠隨上萬個細胞進行高速分析，并且可以同時從一個細胞中將多個參數測量出來，下面就讓小編帶你了解一下流式細胞儀的基本原理。
基本原理
染色待測細胞，之后將單細胞懸液制作成功。用一定壓力往流動室內壓入待測樣品，在高壓下從鞘液管噴出不含細胞的磷酸緩沖液，待測樣品流與鞘液管入口方向成一定角度，如此，鞘液就可以包繞著樣品高速流動，使一個圓形的流束組成，在鞘液的包被下待測細胞單行排列，依次從檢測區域通過。
流式細胞儀的發光源一般是激光。在樣品流上垂直照射著經過聚焦整形后的光束，在激光束的照射下的被熒光染色的細胞，會有激發熒光和散射光產生。90度方向的光電倍增管和前向光電二極管同時接收這兩種信號。在前向小角度進行光散射信號的檢測，細胞體積的大小基本上由這種信號來反映。熒光信號的接受方向垂直于激光束，經過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離，使多個不同波長的熒光信號形成。所測細胞膜表面抗原的強度或其核內物質的濃度由這些熒光信號的強度來代表。通過電倍增管接收后能夠轉換為電信號，被計算機識別的數字信號能夠由連續的電信號通過 A/D轉換器轉換而成。計算機處理所測量到的各種信號，在計算機屏幕上顯示分析結果，也能夠打印出來，還能夠在硬盤上以數據文件的形式存儲，從而為以后的查詢或進一步分析做準備。根據不同的測量參數提供了多種檢測數據的顯示形式。使用直方圖的形式來表達單參數數據，其細胞數目為Y軸，測量強度為X軸。通常而言，512或1024通道數為流式細胞儀坐標軸的分辨率，此取決于模數轉換器的分辨率。關于雙參數或多參數數據，不僅能夠對每個參數的直方圖單獨顯示，而且能夠對二維的三點圖、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖進行選擇。
通過對含有單細胞的液滴進行分離來實現細胞的分選。將一個超高頻電晶體配備在流動室的噴口上，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，在這些液滴之中分散待測定細胞。將正負不同的電荷充入這些液滴中，當液滴從帶有幾千伏特的偏轉板流經時，在高壓電場的作用下偏轉，往各自的收集容器中落入，往中間的廢液容器落入不予充電的液滴，從而使得細胞的分離實現。
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